| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一篇 金黄色葡萄球菌RNase Ⅲ的催化机理研究 | 第13-57页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| ·引言 | 第13-16页 |
| ·细菌RNase Ⅲ | 第16-20页 |
| ·细菌RNase Ⅲ的结构组成 | 第16-18页 |
| ·细菌RNase Ⅲ的催化机制 | 第18-19页 |
| ·细菌RNase Ⅲ的底物结合机制 | 第19-20页 |
| ·金黄色葡萄球菌RNase Ⅲ | 第20-21页 |
| ·金黄色葡萄球菌RNase Ⅲ简介 | 第20-21页 |
| ·金黄色葡萄球菌RNaseⅢ的功能 | 第21页 |
| ·选题意义和研究内容 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第23-37页 |
| ·材料和仪器 | 第23-24页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·仪器设备 | 第24页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ表达质粒构建 | 第24-29页 |
| ·PCR反应体系和程序 | 第26-27页 |
| ·PCR产物和载体的双酶切反应 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27-28页 |
| ·转化反应 | 第28页 |
| ·菌落鉴定和质粒鉴定 | 第28-29页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ突变体质粒构建 | 第29-30页 |
| ·蛋白的小量试表达和大量表达 | 第30-32页 |
| ·重组质粒的转化 | 第30-31页 |
| ·小量试表达 | 第31页 |
| ·小量试表达情况检测 | 第31页 |
| ·蛋白的大量表达 | 第31-32页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ的晶体生长(此部分工作由张巍昌师兄完成) | 第33页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ衍射数据的收集、处理和结构解析(此部分工作由汪成亮师兄完成) | 第33-34页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ体外酶活实验 | 第34-37页 |
| ·底物合成 | 第34页 |
| ·底物退火 | 第34-35页 |
| ·酶活反应 | 第35-37页 |
| 第三章 实验结果和讨论 | 第37-51页 |
| ·重组表达质粒构建和蛋白试表达 | 第37页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ的晶体生长(由张巍昌师兄完成) | 第38页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ(N-169)晶体的结构解析(由汪成亮师兄完成) | 第38-40页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ(N-169)的结构分析 | 第40-46页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ(N-169)的整体结构 | 第40-41页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ(N-169)与其它细菌RNase Ⅲ的结构比对 | 第41-42页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ与其它细菌RNase Ⅲ的序列比对 | 第42-43页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ(N-169)的活性中心 | 第43-44页 |
| ·Sa-RNaseⅢ突变体对其聚集状态的影响 | 第44-46页 |
| ·Sa-RNase Ⅲ体外酶活实验 | 第46-49页 |
| ·金属离子对Sa-RNase Ⅲ活性的影响 | 第46-48页 |
| ·活性中心关键氨基酸残基对Sa-RNase Ⅲ活性的影响 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 第二篇 动粒蛋白Mis12复合物与相关蛋白的相互作用研究 | 第57-95页 |
| 第一章 绪论 | 第57-67页 |
| ·引言 | 第57-59页 |
| ·动粒蛋白 | 第59-61页 |
| ·内层动粒 | 第59-60页 |
| ·外层动粒 | 第60-61页 |
| ·Mis12复合物 | 第61-62页 |
| ·Ndc80复合物 | 第62页 |
| ·内层动粒与外层动粒的连接 | 第62-63页 |
| ·减数分裂与单极定向 | 第63-64页 |
| ·Monopolin复合物 | 第64页 |
| ·Csm1蛋白 | 第64-65页 |
| ·选题意义和研究内容 | 第65-67页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第67-75页 |
| ·实验材料和仪器 | 第67页 |
| ·实验仪器 | 第67页 |
| ·实验试剂 | 第67页 |
| ·实验菌株和培养基 | 第67页 |
| ·表达质粒的构建和小量试表达 | 第67-69页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第67-68页 |
| ·目的蛋白的小量试表达 | 第68-69页 |
| ·蛋白的大量表达 | 第69-70页 |
| ·人源Dsn1、Nsl1截短体的大量表达 | 第69-70页 |
| ·人源Ndc80~(Bonsai)复合物的大量表达 | 第70页 |
| ·裂殖酵母Ndc80~(Bonsai)复合物的大量表达 | 第70页 |
| ·酿酒酵母Csm1蛋白的大量表达 | 第70页 |
| ·酿酒酵母Dsn1 N端截短体蛋白的大量表达 | 第70页 |
| ·蛋白的纯化 | 第70-73页 |
| ·概述 | 第70-71页 |
| ·亲和层析法 | 第71页 |
| ·离子交换法 | 第71-72页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第72-73页 |
| ·蛋白的晶体生长 | 第73页 |
| ·酿酒酵母Csm1与Dsn1(88-110)多肽复合物的晶体生长 | 第73页 |
| ·GST pull-down | 第73-75页 |
| ·酿酒酵母Csm1与Dsnl的GST pull-down实验 | 第73-75页 |
| 第三章 实验结果和讨论 | 第75-87页 |
| ·Ndc80复合物与Mis12复合物的相互作用研究 | 第75-81页 |
| ·人源Ndc80~(bonsai)复合物与Mis12复合物的相互作用 | 第75-78页 |
| ·裂殖酵母Ndc80~(bonsai)复合物与Mis12复合物的相互作用 | 第78-81页 |
| ·酿酒酵母Csm1与Dsn1的相互作用 | 第81-85页 |
| ·酿酒酵母Csm1与Dsn1的相互作用 | 第81-84页 |
| ·酿酒酵母Csm1与Dsn1多肽复合物的晶体生长 | 第84-85页 |
| ·本章小结 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
