| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-20页 |
| 1 杜氏盐藻的生物学特性 | 第11页 |
| ·盐藻的分类及形态特征 | 第11页 |
| ·盐藻的生理特性 | 第11页 |
| 2 杜氏盐藻耐盐机制的研究进展 | 第11-14页 |
| ·盐藻渗透调节的研究 | 第11-12页 |
| ·盐藻耐盐相关基因和蛋白质的研究 | 第12-13页 |
| ·盐藻渗透胁迫信号转导途径的研究 | 第13-14页 |
| 3 蛋白激酶C及其研究进展 | 第14-17页 |
| ·蛋白激酶C的发现、种类及结构特点 | 第14-16页 |
| ·蛋白激酶C的发现 | 第14页 |
| ·蛋白激酶C的种类 | 第14-15页 |
| ·蛋白激酶C的结构特点 | 第15-16页 |
| ·蛋白激酶C的激活机制 | 第16页 |
| ·蛋白激酶C的生理功能 | 第16-17页 |
| 4 植物盐胁迫诱导信号转导途径的研究概况 | 第17-19页 |
| ·Ca~(2+)信号通路与其他信号通路的作用网络 | 第17-18页 |
| ·CDPK信号反应途径 | 第18页 |
| ·MAPK级联反应途径 | 第18-19页 |
| 5 研究目的和意义 | 第19页 |
| 6 研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 杜氏盐藻PKC的原核表达、纯化及性质研究 | 第20-34页 |
| 1 实验材料 | 第20-21页 |
| ·藻种、菌种和质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-27页 |
| ·杜氏盐藻总RNA的提取 | 第21页 |
| ·杜氏盐藻PKC基因的RT-PCR扩增 | 第21-22页 |
| ·杜氏盐藻PKC基因原核表达载体的构建 | 第22页 |
| ·杜氏盐藻PKC基因融合蛋白的诱导表达 | 第22-24页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第24页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第24页 |
| ·Western blotting检测 | 第24-25页 |
| ·杜氏盐藻PKC的性质研究 | 第25-27页 |
| ·融合蛋白的透析、浓缩及浓度测定 | 第25-26页 |
| ·PKC活性的定性检测 | 第26-27页 |
| ·辅助因子Ca~(2+)及DAG对酶活性的影响 | 第27页 |
| ·PKC活性的定量检测 | 第27页 |
| 3 实验结果 | 第27-32页 |
| ·盐藻总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·盐藻PKC基因的克隆及原核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及表达形式分析 | 第29页 |
| ·融合蛋白的纯化及Western blotting鉴定 | 第29-30页 |
| ·盐藻PKC活性的定性检测 | 第30-31页 |
| ·盐藻PKC活性的定量检测 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 杜氏盐藻PKC的亚细胞定位与移位分析 | 第34-43页 |
| 1 实验材料 | 第34页 |
| ·菌种 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-38页 |
| ·含PKC基因和GFP基因质粒的提取 | 第34页 |
| ·PKC及GFP基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·杜氏盐藻PKC基因亚细胞定位载体的构建 | 第35-36页 |
| ·重组表达载体pMDC-GFP的构建 | 第35-36页 |
| ·亚细胞定位载体pMDCG-PKC的构建 | 第36页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·重组质粒冻融法转化农杆菌及其检测 | 第37页 |
| ·重组质粒冻融法转化农杆菌 | 第37页 |
| ·重组质粒冻融法转化农杆菌的检测 | 第37页 |
| ·农杆菌工程菌液的制备 | 第37页 |
| ·农杆菌介导法侵染洋葱表皮细胞 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-42页 |
| ·盐藻PKC基因和绿色荧光蛋白基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·盐藻PKC基因亚细胞定位表达载体的构建 | 第39页 |
| ·工程菌的制备及检测 | 第39-40页 |
| ·盐藻PKC的亚细胞定位分析 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 杜氏盐藻PKC基因转化烟草的研究 | 第43-54页 |
| 1 实验材料 | 第43页 |
| ·菌株与载体 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-48页 |
| ·盐藻PKC基因真核表达载体的构建 | 第43-46页 |
| ·含PKC基因质粒的提取 | 第43页 |
| ·PKC基因的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·质粒的大量提取(pMD Simple-PKC和pRI 101) | 第44-45页 |
| ·质粒pMD Simple-PKC和pRI 101的双酶切 | 第45页 |
| ·真核表达载体pRI 101-PKC的构建 | 第45-46页 |
| ·目的基因的遗传转化 | 第46-48页 |
| ·重组质粒pRI 101-PKC转化农杆菌 | 第46页 |
| ·农杆菌介导烟草的遗传转化 | 第46-47页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第47-48页 |
| 3 实验结果 | 第48-52页 |
| ·盐藻PKC基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·盐藻pMD19-PKC检验 | 第49页 |
| ·杜氏盐藻PKC基因真核表达载体pRI 101-PKC的构建 | 第49-50页 |
| ·工程菌的制备及检测 | 第50页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第50-51页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 结论与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
