| 致谢 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1 胚胎癌细胞的研究概况 | 第13页 |
| 2 胚胎干细胞的研究进展 | 第13-14页 |
| 3 小鼠 ES 细胞的研究进展 | 第14页 |
| 4 人胚胎干细胞的研究概况 | 第14-16页 |
| 5 从原始生殖细胞中分离多能性细胞系 | 第16-17页 |
| 6 胚胎干细胞生物学特性 | 第17-20页 |
| ·胚胎干细胞的形态 | 第17页 |
| ·胚胎干细胞的多能性 | 第17页 |
| ·胚胎干细胞表面抗原标志 | 第17页 |
| ·维持胚胎干细胞生物学特性的分子机制及相关信号转导通路 | 第17-20页 |
| ·LIF 信号通路对 ESCs 多能性的维持 | 第17-18页 |
| ·Nanog 对 ESCs 多能性的维持 | 第18页 |
| ·BMP 信号通路对 ESCs 多能性的维持 | 第18-19页 |
| ·Wnt 通路对 ESCs 多能性的维持 | 第19页 |
| ·Oct-4 与 ESCs 多能性的维持 | 第19-20页 |
| 7 ES 细胞分离培养的影响因素 | 第20-21页 |
| ·胚胎质量及胚胎类型 | 第20页 |
| ·饲养层对 ES 细胞分离培养的影响 | 第20页 |
| ·培养基对 ES 细胞分离培养的影响 | 第20-21页 |
| ·添加物对 ES 细胞分离培养的影响 | 第21页 |
| ·血清 | 第21页 |
| ·其他添加剂 | 第21页 |
| ·ES 细胞传代时间及消化液的影响 | 第21页 |
| 8 ES 细胞的鉴定方法 | 第21-23页 |
| ·碱性磷酸酶活性鉴定 | 第21-22页 |
| ·转录因子 Oct-4 及 Nanog 的表达检测 | 第22页 |
| ·核型分析 | 第22页 |
| ·体内分化能力鉴定 | 第22页 |
| ·体外分化能力鉴定 | 第22-23页 |
| ·嵌合体实验鉴定 | 第23页 |
| 9 ES 细胞体外分化的研究现状 | 第23-28页 |
| ·ES 细胞分化为造血细胞 | 第24页 |
| ·ES 细胞分化为神经细胞 | 第24-25页 |
| ·ES 细胞分化为肝细胞 | 第25页 |
| ·ES 细胞分化为心肌细胞 | 第25-26页 |
| ·ES 细胞分化为胰岛细胞 | 第26-27页 |
| ·ES 细胞向雄性生殖细胞的分化 | 第27-28页 |
| 10 ES 细胞的应用前景 | 第28页 |
| 11 ES 细胞研究面临的难题与挑战 | 第28-30页 |
| 第二章 兔类 ES 细胞体外培养体系的优化及鉴定 | 第30-51页 |
| 1 引言 | 第30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-36页 |
| ·试验材料 | 第30-31页 |
| ·试验动物 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·主要溶液的配制 | 第31-33页 |
| ·丝裂霉素-C | 第31页 |
| ·1 mol/L β-巯基乙醇存储液 | 第31页 |
| ·0.2 mol/L L-谷氨酰胺存储液 | 第31页 |
| ·0.2%TritonX-100 | 第31页 |
| ·细胞消化液 A:0.05%胰酶+0.02% EDTA 消化液 | 第31-32页 |
| ·细胞消化液 B:0.25%胰酶+0.04% EDTA 消化液 | 第32页 |
| ·PMSG 注射液 | 第32页 |
| ·hCG 注射液 | 第32页 |
| ·4%多聚甲醛 | 第32页 |
| ·高糖 DMEM 培养液 | 第32页 |
| ·MEF 培养液 | 第32页 |
| ·兔类 ES 细胞培养液 | 第32页 |
| ·MEF 冻存液 | 第32-33页 |
| ·试验方法 | 第33-36页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞的分离培养 | 第33页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞的传代培养 | 第33页 |
| ·小鼠胎儿成纤维细胞的冻存与复苏 | 第33页 |
| ·MEF 饲养层的制备 | 第33页 |
| ·细胞计数 | 第33-34页 |
| ·兔胚胎的获取与处理 | 第34页 |
| ·兔胚胎的获取 | 第34页 |
| ·兔胚胎的处理 | 第34页 |
| ·兔类 ES 细胞分离与传代 | 第34-35页 |
| ·ICM 的培养 | 第34页 |
| ·兔类 ES 细胞的传代 | 第34-35页 |
| ·兔类 ES 细胞在不同培养基上生长传代情况 | 第35页 |
| ·兔类 ES 细胞的鉴定 | 第35-36页 |
| ·形态学观察 | 第35页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第35页 |
| ·免疫荧光染色 | 第35页 |
| ·体外分化潜能 | 第35页 |
| ·对多能性基因 Sox2、Nanog、GAPDH mRNA 的表达进行 RT-PCR 检测 | 第35-36页 |
| ·数据统计 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-47页 |
| ·超排对兔胚胎贴壁和兔类 ES 细胞克隆的影响 | 第36-37页 |
| ·胚胎的不同处理方式对兔类 ES 细胞分离培养的影响 | 第37-40页 |
| ·兔类 ES 细胞在不同培养基上的生长与传代情况 | 第40-41页 |
| ·兔类 ES 细胞经不同传代方法后的生长传代情况 | 第41-44页 |
| ·兔类 ES 细胞的鉴定 | 第44-47页 |
| ·形态结构的鉴定 | 第44-45页 |
| ·碱性磷酸酶鉴定 | 第45页 |
| ·免疫荧光鉴定 | 第45-46页 |
| ·体外分化能力的鉴定 | 第46-47页 |
| ·多能性基因的鉴定 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| ·超数排卵对兔囊胚贴壁和兔类 ES 细胞克隆的影响 | 第47-48页 |
| ·胚胎的不同处理方式对兔类 ES 细胞分离培养的影响 | 第48页 |
| ·兔囊胚在不同培养基上的生长、传代情况 | 第48-49页 |
| ·不同传代方法对兔类 ES 细胞分离传代的影响 | 第49页 |
| ·兔类 ES 细胞鉴定 | 第49页 |
| 5 小结 | 第49-51页 |
| 第三章 兔类 ES 细胞向原始生殖细胞诱导的初步探讨 | 第51-57页 |
| 1 引言 | 第51页 |
| 2 材料与方法 | 第51-52页 |
| ·试验材料 | 第51页 |
| ·试验对象 | 第51页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第51页 |
| ·主要试剂的配制 | 第51-52页 |
| ·视黄酸 | 第51页 |
| ·诱导基础液和诱导液 | 第51-52页 |
| ·试验方法 | 第52页 |
| ·类胚体的制作 | 第52页 |
| ·RA 体外诱导兔类 ES 细胞定向分化 | 第52页 |
| ·DNA 倍体分析 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-55页 |
| ·ES 细胞生长情况及鉴定 | 第52-53页 |
| ·ES 细胞定向诱导分化后的形态特征 | 第53-54页 |
| ·DNA 倍体分析结果 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 5 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-70页 |
| 中英文缩略语表 | 第70-71页 |
| ABSTRACT | 第71-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
