| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 引言 | 第11-19页 |
| 1 转基因鱼类的研究进展 | 第12-13页 |
| 2 Tgf2 转座子的研究进展 | 第13-15页 |
| 3 鱼类γ-干扰素基因研究进展 | 第15-18页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第一章 尼罗罗非鱼γ-干扰素的克隆及表达研究 | 第19-37页 |
| 1 材料 | 第19-20页 |
| 2 实验方法 | 第20-28页 |
| ·尼罗罗非鱼脾脏组织总 RNA 的提取 | 第20页 |
| ·尼罗罗非鱼γ-干扰素 cDNA 的合成与克隆 | 第20-22页 |
| ·尼罗罗非鱼γ-干扰素序列分析与进化树构建 | 第22-23页 |
| ·尼罗罗非鱼γ-干扰素基因的组织表达特征分析 | 第23-25页 |
| ·尼罗罗非鱼γ-干扰素原核表达载体 pET-30c(+)-γIFN 的构建 | 第25-27页 |
| ·重组蛋白诱导表达及包涵体纯化 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE 和 Western blot 检测 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-35页 |
| ·γ-干扰素基因 cDNA 与氨基酸序列分析 | 第28-30页 |
| ·同源性及系统进化分析 | 第30-31页 |
| ·用于 qRT-PCR 的尼罗罗非鱼内参基因的筛选 | 第31-32页 |
| ·正常尼罗罗非鱼γ-干扰素基因的组织表达 | 第32页 |
| ·感染无乳链球菌后尼罗罗非鱼γ-干扰素基因的组织表达变化 | 第32-33页 |
| ·γ-干扰素蛋白的诱导表达、纯化及 Western blot 分析 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 Tgf2 转座系统在转 RFP 基因斑马鱼上的应用 | 第37-49页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-43页 |
| ·肌肉特异性表达的 Tgf2 转座子供体质粒 pTgf2-Mylz2-RFP 的构建 | 第38-41页 |
| ·Tgf2 转座酶 mRNA 的体外转录 | 第41-43页 |
| ·显微注射 | 第43页 |
| ·转基因鱼的培育及转基因斑马鱼 F1 代和 F2 代的获得及检测 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-46页 |
| ·肌肉特异性表达转座子供体质粒 pTgf2-Mylz2-RFP 的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| ·Tgf2 转座子介导 RFP 基因的转植与表达 | 第44-45页 |
| ·转 RFP 基因鱼 F1 代及 F2 代的获得与检测 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 第三章 尼罗罗非鱼γ-干扰素基因转植载体的构建及在斑马鱼上的转植 | 第49-55页 |
| 1 材料 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-52页 |
| ·pTgf2-hsp70-γIFN 表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·显微注射 | 第52页 |
| ·转基因鱼的培育及转基因斑马鱼 F0 代的检测和 F1 代的获得 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-53页 |
| ·表达载体的构建 | 第52页 |
| ·显微注射 | 第52页 |
| ·转基因鱼的培育及转基因斑马鱼 F0 代的检测和 F1 代的获得 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 全文总结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 在读期间发表文章与学术交流 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
