缩略语表 | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
英文摘要 | 第10-14页 |
前言 | 第14-16页 |
文献回顾 | 第16-34页 |
第一部分 端粒酶逆转录酶基因hTERT在膀胱癌组织中的表达 | 第34-39页 |
一、 材料 | 第34-35页 |
(一) 病历标本 | 第34页 |
(二) 主要试剂 | 第34-35页 |
二、 方法 | 第35页 |
三、 结果 | 第35-37页 |
(一) hTERT蛋白表达的定位与分布 | 第35-36页 |
(二) hTERT蛋白表达与TCC生物学行为的关系 | 第36-37页 |
四、 讨论 | 第37-39页 |
第二部分 端粒酶反义寡核苷酸(ASODN-t)对T24膀胱癌细胞的作用 | 第39-48页 |
一、 主要材料 | 第39-40页 |
(一) 膀胱癌细胞株 | 第39页 |
(二) 主要试剂 | 第39-40页 |
(三) 主要仪器 | 第40页 |
二、 实验方法 | 第40-41页 |
(一) 细胞培养 | 第40页 |
(二) 实验分组 | 第40页 |
(三) 细胞形态学观察 | 第40-41页 |
(四) MTT法测定细胞生长曲线 | 第41页 |
(五) 透射电镜观察 | 第41页 |
(六) 流式细胞仪(FCM)检测 | 第41页 |
(七) 统计学处理 | 第41页 |
三、 实验结果 | 第41-45页 |
(一) 光镜观察结果 | 第41-42页 |
(二) 透射电镜观察结果 | 第42页 |
(三) MTT测定T24膀胱癌细胞生长变化 | 第42-43页 |
(四) 流式细胞仪(FCM)测定DNA含量及细胞周期变化 | 第43-45页 |
四、 讨论 | 第45-48页 |
(一) 端粒酶反义寡核苷酸(ASODN-t)抑制T24膀胱癌细胞增殖 | 第46页 |
(二) 端粒酶反义寡核苷酸(ASODN-t)诱导T24膀胱癌细胞凋亡 | 第46-47页 |
(三) 端粒酶反义寡核苷酸(ASODN-t)影响T24膀胱癌细胞周期 | 第47-48页 |
第三部分 端粒酶反义RNA转染逆转膀胱癌T24细胞恶性表型的研究 | 第48-59页 |
一、 主要材料 | 第48-50页 |
(一) 膀胱癌细胞株 | 第48页 |
(二) 质粒与菌种 | 第48-49页 |
(三) 主要试剂 | 第49页 |
(四) 主要仪器 | 第49-50页 |
(五) 实验动物 | 第50页 |
二、 实验方法 | 第50-52页 |
(一) 质粒DNA转化与提取 | 第50页 |
(二) 细胞分组转染和筛选 | 第50页 |
(三) 转染前后T24细胞端粒酶活性检测 | 第50-51页 |
(四) 转染前后T24细胞恶性表型的变化 | 第51页 |
(五) 转染前后T24细胞周期FCM检测 | 第51页 |
(六) 裸鼠移植瘤实验 | 第51页 |
(七) 统计学处理 | 第51-52页 |
三、 实验结果 | 第52-56页 |
(一) 反义RNA质粒的酶切鉴定 | 第52页 |
(二) 转染后T24细胞抗性克隆筛选 | 第52页 |
(三) 转染后T24细胞的端粒酶活性变化 | 第52页 |
(四) 转染后T24细胞的生长曲线变化 | 第52-53页 |
(五) 转染后T24细胞的形态学变化 | 第53页 |
(六) 转染后T24细胞的超微结构变化 | 第53-54页 |
(七) 转染后T24细胞的细胞周期变化 | 第54-55页 |
(八) 裸鼠移植瘤实验 | 第55-56页 |
四、 讨论 | 第56-59页 |
(一) pBBS及pBBS-hTR载体的酶切鉴定 | 第57页 |
(二) 反义hTR抑制T24细胞端粒酶活性 | 第57页 |
(三) 反义hTR诱导T24细胞出现凋亡现象 | 第57页 |
(四) 反义hTR逆转膀胱癌T24细胞恶性表型 | 第57-59页 |
小结 | 第59-61页 |
致谢 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-74页 |
附图 | 第74-83页 |
发表论文 | 第83页 |