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猪瘟病毒疫苗株反向遗传学改造并拯救及疫苗在病毒进化中的影响

目录第1-6页
中文摘要第6-8页
Abstract第8-10页
第一部分 文献综述——猪瘟病毒研究进展第10-31页
 一、猪瘟(Swine fever)第10-14页
 二、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)第14-29页
 三、猪瘟疫苗的发展第29-30页
 四、本研究的主要任务第30-31页
第二部分 猪瘟病毒 E2 基因抗原性分析及抗体制备第31-63页
 一、材料第31-41页
  1、载体菌株实验动物第31页
  2、主要试剂第31-32页
  3、溶液配制第32-40页
  4、主要仪器设备第40-41页
 二、方法第41-55页
  1、E2 基因和蛋白生物信息学分析第41-42页
  2、E2 基因的提取及原核表达载体的构建第42-48页
  3、E2 蛋白的表达、鉴定与纯化第48-52页
  4、抗血清的制备及鉴定第52-55页
 三、结果第55-62页
  1、E2 基因和蛋白生物信息学分析第55-57页
  2、E2 基因的提取及原核表达载体的构建第57-59页
  3、E2 蛋白的表达、鉴定与纯化第59-61页
  4、抗血清的制备及鉴定第61-62页
 四、讨论第62-63页
第三部分 CSFV C 株反向遗传学改造及拯救第63-100页
 一、材料第63-65页
  1、载体菌种细胞系第63-64页
  2、主要试剂第64页
  3、溶液配制第64页
  4、主要仪器设备第64-65页
 二、方法第65-88页
  1、PMC-18-CSFV-rz-T7 质粒的构建第65-69页
  2、PMC-18-CSFV-rz-T7 表达质粒的分节段改造第69-80页
   ·引物的设计和合成第70页
   ·PMC18 –CSFV(含 NS5B)质粒的构建第70-75页
   ·pMC18 –CSFV(不含 NS5B)质粒的构建第75-80页
  3、pEGFP-N3-T7RNAP 、pGEM-T-T7-GFP 质粒扩增与鉴定第80-82页
  4、CSFV 病毒拯救第82-86页
  5、病毒的鉴定第86-88页
 三、结果第88-99页
  1、PMC-18-CSFV-rz-T7 质粒的构建第88-90页
   ·PMD18-T-3’CSFV-rz-T7 质粒的构建及鉴定第88-89页
   ·PMC-18-CSFV-rz-T7 质粒的构建第89-90页
  2、PMC-18-CSFV-rz-T7 表达质粒的分节段改造第90-95页
   ·PMD18-T–CSFV(含 NS5B)质粒的构建第90-91页
   ·PMC18–CSFV(含 NS5B)质粒的构建第91-92页
   ·PMD18-T–CSFV(不含 NS5B)质粒的构建第92-94页
   ·pMC18 –CSFV(不含 NS5B)质粒的构建第94-95页
  3、pEGFP-N3-T7RNAP 、pGEM-T-T7-GFP 质粒扩增与鉴定第95页
  4、CSFV 病毒拯救第95-99页
 四、讨论第99-100页
第四部分 疫苗接种在猪瘟病毒进化中的影响第100-119页
 一、实验材料及方法第100-102页
  1、病毒序列收集及分型第100页
  2、鉴定重组病毒第100页
  3、进化速率及种群动态第100-101页
  4、选择压力分析第101页
  5、密码子偏好性分析第101-102页
 二、结果第102-117页
  1、CSFV 取样分布图第102页
  2、病毒分型第102-105页
  3、鉴定重组病毒第105-109页
  4、进化速率及种群动态第109-112页
  5、选择压力分析第112-113页
  6、密码子偏好性分析第113-117页
 三、讨论第117-119页
第五部分 结论第119-120页
附录第120-142页
 附录 1 E2 基因的测序结果结果第120页
 附录 2 PMD18T-3’CSFV-rz-T7 测序结果第120-121页
 附录 3 PMC18 –CSFV(含 NS5B)测序结果第121-123页
 附录 4 PMC18 –CSFV(不含 NS5B)测序结果第123-126页
 附录 5 贝叶斯因子分析表第126-130页
 附录 6 Q 模型聚类分析中使用的 CSFV 的 RSCU第130-133页
 附录 7 进化研究用到的 CSFV 序列第133-142页
参考文献第142-157页
致谢第157-158页
攻读硕士学位期间发表文章第158页

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