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燕麦嗜酸菌鞭毛素FliCaaa诱导水稻免疫反应的研究

摘要第1-9页
Abstract第9-10页
第一章 引言第10-19页
 1 植物与病原菌的互作第10-11页
   ·植物的免疫系统第10页
   ·引起植物免疫反应的PAMPs第10-11页
 2 细菌鞭毛素与植物的互作第11-14页
   ·细菌鞭毛的结构组成第11页
   ·植物识别细菌鞭毛素的活性位点第11-12页
   ·识别细菌鞭毛素的植物受体第12-14页
 3 鞭毛素诱导的植物防卫反应第14-16页
   ·鞭毛素诱导的早期防卫反应第14-15页
   ·鞭毛素诱导防卫基因的表达第15-16页
 4 燕麦嗜酸菌鞭毛素诱导的水稻防卫反应第16-17页
 5 研究目的和意义第17-19页
第二章 材料与方法第19-34页
 1 实验材料第19-21页
   ·供试菌株和植物第19页
   ·主要仪器和试剂第19页
   ·培养基和培养条件第19-21页
 2 实验方法第21-34页
   ·燕麦嗜酸菌菌株诱导水稻免疫反应的测定第21页
     ·水稻接种实验第21页
     ·台酚蓝染色法检测水稻叶片细胞死亡第21页
     ·DAB染色法检测水稻叶片H_2O_2的产生第21页
   ·鞭毛素的基因克隆与生物信息学分析第21-25页
     ·Aaa IPN1基因组DNA的提取第21-22页
     ·引物设计第22-23页
     ·目的基因PCR扩增第23-24页
     ·目的基因片段纯化回收第24页
     ·PCR产物TA克隆第24页
     ·E.coli感受态细胞的制备及转化第24-25页
     ·重组质粒DNA提取第25页
     ·Aaa IPN1鞭毛素蛋白生物信息学分析第25页
   ·鞭毛素基因原核表达载体构建和目的蛋白纯化第25-30页
     ·FliCaaa、FliCaaa-N和FliCaaa-C蛋白表达载体构建第25-26页
     ·FliCaaa、FliCaaa-N和FliCaaa-C蛋白表达与纯化第26-30页
     ·fliC2aaa、fliC2aaa-N和fliC2aaa-C基因克隆和原核表达载体构建第30页
     ·FliC2aaa、FliC2aaa-N和FliC2aaa-C蛋白的诱导表达和纯化第30页
   ·鞭毛素蛋白诱导水稻免疫反应的测定第30-34页
     ·鞭毛素蛋白诱导水稻防卫基因的表达情况第30-33页
     ·鞭毛素蛋白诱导水稻悬浮细胞ROS测定第33页
     ·鞭毛素蛋白诱导水稻悬浮细胞介质碱性化测定第33-34页
第三章 结果与分析第34-52页
 1 Aaa IPN1诱导水稻免疫反应的分析第34-35页
   ·Aaa IPN1引起水稻细胞死亡检测第34页
   ·Aaa IPN1引起水稻产生H_2O_2检测第34-35页
 2 Aaa IPN1鞭毛素基因的克隆和生物信息学分析第35-40页
   ·目的基因fliCaaa和fliC2aaa的获得第35-37页
     ·基因片段A1和A2克隆第35页
     ·基因片段A1N、A1C和A2N克隆第35-36页
     ·鞭毛素基因fliCaaa和fliC2aaa克隆第36-37页
   ·鞭毛素FliCaaa和FliC2aaa生物信息学分析第37-40页
 3 FliCaaa蛋白及其不同结构域诱导水稻免疫反应的功能分析第40-49页
   ·目的基因fliCaaa、fliCaaa-N和fliCaaa-C获得和表达质粒构建第40-42页
   ·目的蛋白的诱导表达第42-44页
   ·FliCaaa、FliCaaa-N和FliCaaa-C蛋白纯化和Western blot验证第44-45页
   ·FliCaaa蛋白及其结构域对水稻叶组织细胞死亡的诱导作用第45-46页
   ·FliCaaa蛋白及其结构域对水稻叶组织H_2O_2产生的诱导作用第46页
   ·FliCaaa蛋白及其结构域对水稻防卫基因表达的诱导作用第46-48页
   ·FliCaaa蛋白及其结构域对水稻悬浮细胞ROS的诱导作用第48页
   ·FliCaaa蛋白及其结构域对水稻悬浮细胞介质碱性化的诱导作用第48-49页
 4 FliC2aaa蛋白及其不同结构域诱导水稻免疫反应的功能分析第49-52页
   ·fliC2aaa、fliC2aaa-N和fliC2aaa-C基因克隆第49页
   ·fliC2aaa、fliC2aaa-N和fliC2aaa-C基因表达载体的第49-50页
   ·目的蛋白的诱导和纯化第50-51页
   ·FliC2aaa蛋白及其结构域对水稻叶组织细胞死亡和H_2O_2产生的诱导作用第51-52页
第四章 结论与讨论第52-55页
参考文献第55-59页
附录1 英文缩略表第59-60页
附录2:蛋白表达纯化试剂配方第60-61页
附表本研究中所用引物第61-62页
致谢第62页

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