| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| ·酵母甘油合成关键酶概况 | 第11-13页 |
| ·甘油的性质及其用途 | 第11页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶和 3-磷酸甘油酯酶 | 第11-12页 |
| ·酵母产甘油机制及其代谢过程 | 第12-13页 |
| ·甘油合成关键酶基因的应用 | 第13-18页 |
| ·1,3-丙二醇概况 | 第13页 |
| ·1,3-丙二醇的生产方法 | 第13-15页 |
| ·微生物法合成 1,3-丙二醇研究状况 | 第15-17页 |
| ·1,3-丙二醇生产菌株 | 第17页 |
| ·克雷伯氏菌 1,3-丙二醇合成途径 | 第17-18页 |
| ·克雷伯氏菌产 1,3-丙二醇研究进展 | 第18页 |
| ·产 1,3-丙二醇基因工程菌的研究 | 第18-19页 |
| ·一步法产 1,3-丙二醇 | 第19页 |
| ·本课题的研究意义及主要研究内容 | 第19-23页 |
| ·研究意义 | 第19-20页 |
| ·主要研究内容 | 第20-23页 |
| 第2章 甘油合成关键酶基因的克隆及生物信息学分析 | 第23-35页 |
| ·材料与仪器设备 | 第23-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·工具酶与试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·培养方法 | 第24页 |
| ·分析方法 | 第24页 |
| ·酵母基因组 DNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·PCR 引物设计合成及反应体系 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物胶回收及载体连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第26-27页 |
| ·验证与保菌 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-34页 |
| ·关键酶基因 CgGPD 及 ScGPP2 的克隆 | 第27-29页 |
| ·CgGPD 及 ScGPP2 基因的序列及遗传密码分析 | 第29-32页 |
| ·CgGPD 和 ScGPP2 基因的遗传进化及结构分析 | 第32-34页 |
| ·小结与讨论 | 第34-35页 |
| 第3章 甘油合成关键酶基因的表达分析 | 第35-47页 |
| ·材料与仪器 | 第35-36页 |
| ·菌株 | 第35页 |
| ·工具酶与试剂 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-39页 |
| ·培养方法 | 第36页 |
| ·重组质粒的构建 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第37页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第37页 |
| ·克雷伯氏菌电转化感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·电转化克雷伯氏菌 | 第38页 |
| ·粗酶液的制备方法 | 第38页 |
| ·酶活测定方法 | 第38-39页 |
| ·蛋白含量测定 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-45页 |
| ·重组质粒 pEtac-CgGPD, pEtac-ScGPP2 和 pEtac-CgGPD-tac-ScGPP2 的构建 | 第39-41页 |
| ·关键酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第41-43页 |
| ·甘油合成途径在克雷伯氏菌株的构建及关键酶基因的表达 | 第43-45页 |
| ·小结与讨论 | 第45-47页 |
| 第4章 甘油关键酶基因在克雷伯氏菌产 PDO 发酵中的应用 | 第47-55页 |
| ·材料与仪器设备 | 第47-48页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48页 |
| ·培养方法 | 第48页 |
| ·测定方法 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-54页 |
| ·含甘油关键基因克雷伯氏菌的摇瓶发酵分析 | 第48-51页 |
| ·产 PDO 发酵培养基的优化 | 第51-53页 |
| ·葡萄糖-甘油-PDO 在克雷伯氏菌代谢途径的分析 | 第53-54页 |
| ·小结与讨论 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 攻读硕士学位期间学术成果 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
