| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-16页 |
| ·糖尿病血管病变简介 | 第10页 |
| ·糖尿病血管病变发病机制 | 第10-11页 |
| ·血管损伤病变的标志 | 第11页 |
| ·miRNA简介及作用机理 | 第11-13页 |
| ·miR-375研究进展 | 第13-14页 |
| ·本研究的目的、意义及技术路线 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-34页 |
| ·供试材料 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·试剂配制 | 第17-20页 |
| ·主要实验方法 | 第20-34页 |
| ·细胞培养 | 第20-21页 |
| ·建立血管损伤细胞模型 | 第21页 |
| ·实验分组 | 第21页 |
| ·感受态菌种的制备 | 第21-22页 |
| ·以人胚胎脑cDNA文库为模板扩增包含编码miR-375序列 | 第22页 |
| ·胶回收包含编码miR-375序列扩增产物 | 第22-23页 |
| ·包含编码miR-375序列胶回收纯化产物与T质粒连接 | 第23页 |
| ·T-miR-375质粒抽提 | 第23-24页 |
| ·T-miR-375阳性克隆菌PCR扩增和T-miR-375阳性质粒酶切鉴定 | 第24页 |
| ·pEGFP-N1-miR375质粒的构建 | 第24-25页 |
| ·pEGFP-N1-miR375阳性克隆菌PCR扩增和pEGFP-N1-miR375阳性质粒的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·pEGFP-N1-miR375转染Huvec12细胞 | 第25-26页 |
| ·转染后Huvec12细胞总RNA的获得 | 第26页 |
| ·PCR | 第26-27页 |
| ·RNA逆转录 | 第27页 |
| ·Real time RT-PCR检测基因表达 | 第27-28页 |
| ·MiR-375检测 | 第28-30页 |
| ·Western blot | 第30-31页 |
| ·细胞免疫荧光染色 | 第31-32页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第32页 |
| ·ELISA检测细胞上清中sICAM1 | 第32-33页 |
| ·检测细胞中的NFκB活性水平 | 第33-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-43页 |
| ·pEGFP-N1-miR375质粒的构建及检测结果 | 第34-36页 |
| ·细胞培养及建立血管损伤细胞模型结果 | 第36-37页 |
| ·pEGFP-N1-miR375在Huvec12细胞中表达结果 | 第37-38页 |
| ·Realtime PCR检测结果 | 第38-39页 |
| ·Western blot检测 | 第39-40页 |
| ·免疫荧光染色(IF)检测结果 | 第40页 |
| ·细胞中NFκB活性检测结果 | 第40-41页 |
| ·细胞上清中sICAM-1检测结果 | 第41-42页 |
| ·细胞凋亡检测结果 | 第42-43页 |
| 第四章 讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附表 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
