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RBSDV和SRBSDV安徽分离物全基因组特征及SRBSDV mp基因的功能分析

中文摘要第1-6页
Abstract第6-13页
文献综述第13-25页
 1 呼肠孤病毒的分类与结构特征第13-15页
   ·呼肠孤病毒的分类第13页
   ·呼肠孤病毒的结构特征第13-15页
 2 斐济病毒属第15-17页
   ·斐济病毒属的分类第15-16页
   ·斐济病毒属侵染寄主及症状第16页
   ·斐济病毒属侵染寄主及传播途径第16页
   ·斐济病毒属形态学特征第16页
   ·斐济病毒属基因组结构第16-17页
 3 水稻黑条矮缩病研究进展第17-19页
   ·水稻黑条矮缩病的发病情况第17页
   ·水稻黑条矮缩病的病原及症状第17页
   ·水稻黑条矮缩病的寄主及传毒介体第17-18页
   ·水稻黑条矮缩病毒的基因组结构与功能第18-19页
 4 水稻南方黑条矮缩病研究进展第19-22页
   ·水稻南方黑条矮缩病的发病情况第19页
   ·水稻南方黑条矮缩病的病原第19-20页
   ·水稻南方黑条矮缩病的症状第20页
   ·南方水稻黑条矮缩病毒的寄主及传毒介体第20-21页
   ·南方水稻黑条矮缩病毒的基因组结构与功能第21-22页
 5 植物病毒编码的运动蛋白第22-25页
   ·运动蛋白的作用方式第22-23页
   ·运动蛋白介导病毒细胞到细胞间运动的分子机制第23页
   ·运动蛋白在病毒长距离运输中的作用第23-24页
   ·运动蛋白介导的植物抗病性第24-25页
引言第25-26页
材料与方法第26-44页
 1 供试材料第26页
   ·病样来源第26页
   ·植物材料第26页
   ·菌种和载体第26页
   ·酶和化学试剂第26页
   ·常用缓冲溶液和培养基第26页
   ·抗生素第26页
   ·仪器设备第26页
 2 试验方法第26-44页
   ·叶片总 RNA 的提取第26-27页
     ·提 RNA 的准备工作第26-27页
     ·Trizol 抽提液提取总 RNA 方法第27页
   ·cDNA 的合成第27-28页
   ·PCR 技术第28页
   ·PCR 产物的克隆第28-32页
     ·PCR 产物回收和纯化第28-29页
     ·PCR 产物的连接第29页
     ·感受态细胞的制备第29-30页
       ·Ecoli DH5α感受态细胞的少量制备(CaCl2法)第29-30页
       ·农杆菌感受态细胞的少量制备第30页
     ·连接产物的转化第30-31页
       ·连接产物转化大肠杆菌第30页
       ·连接产物转化农杆菌(冻融法)第30-31页
     ·阳性克隆的 PCR 鉴定第31页
     ·质粒提取第31-32页
   ·克隆基因的测序、分析和登录第32页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S9 部分片段的克隆第32页
     ·S9 部分片段的克隆引物设计第32页
     ·S9 部分片段的 RT-PCR 扩增第32页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S9 部分片段的序列分析第32-33页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物全基因组的克隆第33-38页
     ·全基因组的克隆引物设计第33-37页
     ·全基因组的克隆 PCR 扩增第37-38页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物全基因组的序列分析第38-40页
   ·全基因组的序列拼接、确认及提交第40-41页
   ·植物表达载体的构建第41-43页
     ·构建植物表达载体所用引物设计第41页
     ·SRBSDV S9-2、S7-2 和 S5-2 片段的克隆第41页
     ·SRBSDV S9-2、S7-2 和 S5-2 植物表达载体的构建第41-42页
     ·重组植物表达载体转入农杆菌第42页
     ·农杆菌浸润接种第42-43页
   ·基因枪轰击第43页
   ·GUS 染色方法第43页
   ·共聚焦显微镜观察第43-44页
结果与分析第44-78页
 1 安徽省 RBSDV 和 SRBSDV 的分子检测和序列分析第44-47页
   ·安徽省 RBSDV 和 SRBSDV 的分子检测第44-45页
     ·水稻样本的检测第44页
     ·RBSDV 和 SRBSDV 单独侵染样本及混合样本的检测验证第44-45页
     ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S9 部分片段的克隆和测序第45页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S9 部分片段序列比较及分子进化分析第45-47页
 2 RBSDV 和 SRBSDV 全基因组的克隆与序列测定第47-48页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽省分离物全基因组的克隆第47页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽省分离物 S1-S10 全基因组序列的测定第47-48页
 3 RBSDV 和 SRBSDV 全基因组的序列分析第48-71页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S1 全基因组序列分析第48-50页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S2 全基因组序列分析第50-52页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S3 全基因组序列分析第52-54页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S4 全基因组序列分析第54-56页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S5 全基因组序列分析第56-58页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S6 全基因组序列分析第58-60页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S7 全基因组序列分析第60-63页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S8 全基因组序列分析第63-65页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S9 全基因组序列分析第65-68页
   ·RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物 S10 全基因组序列分析第68-71页
 4 SRBSDV mp 基因的初步鉴定第71-78页
   ·利用 PVX 运动缺陷型载体鉴定运动蛋白第71-75页
     ·SRBSDV S9-2、S7-2、S5-2 的克隆第71-73页
     ·SRBSDV S9-2、S7-2、S5-2 植物表达载体的构建第73-74页
     ·PVX 运动缺陷型载体鉴定运动蛋白第74-75页
   ·SRBSDV S7-2、S5-2 在烟草表皮细胞中的定位第75-78页
     ·重组表达载体的构建第75-77页
       ·SRBSDV S9-2、S7-2、S5-2 的克隆第75-76页
       ·重组表达载体的酶切第76-77页
     ·SRBSDV S7-2,S5-2 在烟草表皮细胞中的定位第77-78页
讨论第78-81页
 1 RBSDV 和 SRBSDV 的 RT-PCR 检测第78页
 2 RBSDV 和 SRBSDV 安徽分离物全基因组序列的测定与分析第78-79页
 3 SRBSDV mp 基因的初步鉴定第79-81页
结论第81-82页
参考文献第82-87页
附录 A:常用缓冲液及培养基配方法第87-90页
附录 B:常用的抗生素和激素及使用浓度第90-91页
附录 C:常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器第91-93页
附录 D:本文所用的重要缩写词及中文对照第93-94页
致谢第94-95页
作者简介第95页
[附] 硕士在读期间发表论文第95页

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