| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| ·植物抵御非生物胁迫的分子机制研究现状 | 第12-18页 |
| ·低温胁迫及其转录级联反应 | 第12-15页 |
| ·依赖 CBF 的应答途径：ICE-CBF-COR 转录途径 | 第12-15页 |
| ·非 CBF 依赖型途径 | 第15页 |
| ·盐胁迫和离子信号 | 第15-16页 |
| ·干旱胁迫和渗透信号 | 第16-18页 |
| ·ABA 非依赖型调控机制 | 第16页 |
| ·ABA 依赖型调控机制 | 第16-17页 |
| ·逆境适应下信号传导交联机制 | 第17-18页 |
| ·植物 C2H2 型锌指蛋白研究进展 | 第18-20页 |
| ·C2H2 型锌指蛋白的结构特点和功能区 | 第18-19页 |
| ·C2H2 型锌指蛋白的功能 | 第19-20页 |
| ·C2H2 型锌指蛋白参与调控之物的生长发育 | 第19页 |
| ·C2H2 型锌指蛋白参与植物抗逆反应 | 第19-20页 |
| ·顺式作用元件及转录因子的研究方法 | 第20-22页 |
| ·生物信息学分析与预测 | 第20-21页 |
| ·突变分析法 | 第21页 |
| ·凝胶阻滞法 | 第21页 |
| ·DNase I 足迹法 | 第21页 |
| ·酵母单杂交体系 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 巨桉 C2H2 型锌指蛋白基因 ZFP 家族的克隆 | 第24-36页 |
| ·材料与方法 | 第24-30页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·桉树总 RNA 的提取 | 第24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 RNA | 第24-25页 |
| ·反转录 cDNA 第一链的合成 | 第25-26页 |
| ·目的基因全长 cDNA 的分离 | 第26-30页 |
| ·中间片段的扩增： | 第26-28页 |
| ·5 ' RACE 及 3' RACE | 第28页 |
| ·ZFP 序列的验证 | 第28-29页 |
| ·凝胶回收 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第29-30页 |
| ·序列测定 | 第30页 |
| ·序列比较和分析 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-34页 |
| ·EgrZFP 基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·EgrZFP 蛋白的序列分析 | 第31-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 巨桉 EgrZFP 基因家族的表达分析 | 第36-43页 |
| ·材料与方法 | 第36-38页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·材料的处理 | 第36页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第36页 |
| ·EgrZFP 基因组织特异性表达分析 | 第36-38页 |
| ·冷处理 | 第38页 |
| ·ABA、干旱和盐处理 | 第38页 |
| ·实时荧光定量 RT-PCR | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·巨桉不同器官中 EgrZFP1-7 的表达分析 | 第38-39页 |
| ·EgrZFP1-7 在非生物胁迫下的表达分析 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 酵母单杂交 cDNA 文库构建 | 第43-53页 |
| ·材料与方法 | 第43-49页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·仪器 | 第43页 |
| ·Total RNA 的提取 | 第43页 |
| ·mRNA 的分离 | 第43-44页 |
| ·cDNA 文库的构建 | 第44-48页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第44页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第44-45页 |
| ·cDNA 与三框 attB1 重组接头连接 | 第45页 |
| ·cDNA 分级分离及收集 | 第45-46页 |
| ·BP 重组反应 | 第46页 |
| ·电转化大肠杆菌 DH10B | 第46-47页 |
| ·cDNA 文库（Uncut 型）文库质量鉴定 | 第47-48页 |
| ·酵母单杂交 cDNA 文库的构建 | 第48-49页 |
| ·Uncut 文库的质粒抽提 | 第48页 |
| ·文库质粒重组 | 第48页 |
| ·电转化大肠杆菌 DH10B | 第48-49页 |
| ·酵母单杂交 cDNA 文库质量鉴定 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-52页 |
| ·总 RNA 质量检测 | 第49-50页 |
| ·mRNA 的分离 | 第50页 |
| ·初级 cDNA 文库质量检测 | 第50-51页 |
| ·初级文库的库容量鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组率和插入片段长度鉴定 | 第51页 |
| ·酵母单杂交文库质量检测 | 第51-52页 |
| ·酵母单杂交文库的库容量鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组率和插入片段长度鉴定 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 酵母单杂交系统筛选 EgrZFP1 的转录因子 | 第53-69页 |
| ·材料与方法 | 第53-62页 |
| ·实验试剂 | 第53页 |
| ·启动子序列克隆及顺式作用元件分析 | 第53-54页 |
| ·启动子序列克隆 | 第53-54页 |
| ·启动子序列的验证 | 第54页 |
| ·启动子中瞬时作用元件分析 | 第54页 |
| ·获得 Bait-pAbAi 质粒 | 第54-56页 |
| ·克隆得到 200bp 左右的启动子片段 | 第54-55页 |
| ·重组得到 Bait-pAbAi 质粒 | 第55-56页 |
| ·获取 Bait 酵母菌株 | 第56-59页 |
| ·YPDA 培养基配制 | 第56-57页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第57页 |
| ·线性化 Bait-pAbAi 质粒 | 第57-58页 |
| ·配制 PEG/LiAc 溶液 | 第58页 |
| ·变性 Yeastmaker Carrier DNA | 第58页 |
| ·转化酵母感受态细胞 | 第58页 |
| ·酵母菌液 PCR | 第58-59页 |
| ·Bait 菌株的自激活检测 | 第59页 |
| ·转酵母单杂交文库质粒到 Bait 菌株中 | 第59-60页 |
| ·用 Bait 菌株制备酵母感受态 | 第59-60页 |
| ·变性 Yeastmaker Carrier DNA | 第60页 |
| ·转化酵母感受态细胞 | 第60页 |
| ·筛选出的克隆的阳性分析 | 第60-61页 |
| ·进一步验证酵母单克隆阳性 | 第60页 |
| ·提取酵母中的 PGADT7 质粒 | 第60-61页 |
| ·将提取的 PGADT7 质粒转入大肠杆菌中 | 第61页 |
| ·测序 | 第61页 |
| ·筛选出的阳性克隆功能分析 | 第61-62页 |
| ·测序结果分析 | 第61页 |
| ·实时荧光定量 PCR 筛选的基因低温下的表达分析 | 第61-62页 |
| ·结果与分析 | 第62-67页 |
| ·EgrZFP1 的启动子分析 | 第62-63页 |
| ·EgrZFP1 的启动子克隆检测 | 第62页 |
| ·顺式作用元件分析 | 第62-63页 |
| ·Bait 菌株构建分析 | 第63-64页 |
| ·200 bp 启动子片段克隆结果分析 | 第63页 |
| ·酵母菌液 PCR 检测 Bait 菌株 | 第63-64页 |
| ·Bait 菌株自激活检测分析 | 第64页 |
| ·文库筛选结果分析 | 第64-66页 |
| ·筛选出的基因的表达分析 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第六章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 个人简介 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
