| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-15页 |
| ·猪β-defensin 研究概况 | 第8-13页 |
| ·防御素的分类 | 第8-9页 |
| ·猪β-defensin 的结构 | 第9-10页 |
| ·猪β-defensin 的分布及表达 | 第10-11页 |
| ·猪β-defensin 抑菌活性和机理的研究进展 | 第11-12页 |
| ·猪β-defensin 其它生物学活性的研究 | 第12页 |
| ·猪β-defensin 在生产中的应用 | 第12-13页 |
| ·定点突变 | 第13-15页 |
| ·重叠延伸PCR 法 | 第13页 |
| ·大引物PCR 法 | 第13-14页 |
| ·定点突变试剂盒 | 第14页 |
| ·定点突变技术在本实验中的应用 | 第14-15页 |
| 2 引言 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-25页 |
| ·材料与试剂 | 第16-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第16页 |
| ·菌种及质粒 | 第16页 |
| ·工具酶 | 第16页 |
| ·主要试剂及配制 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·主要应用软件 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第17-18页 |
| ·PCR 获得定点突变目的基因 | 第18页 |
| ·PCR 产物的回收和纯化 | 第18-19页 |
| ·回收的 PCR 产物与 PMD19-T 载体的连接 | 第19页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第19页 |
| ·质粒的提取 | 第19-20页 |
| ·重组质粒PMD19-T-mpBD2 的鉴定 | 第20-21页 |
| ·表达载体PET30a-mpBD2 的构建 | 第21页 |
| ·重组质粒pET30a-mpBD2 的鉴定 | 第21页 |
| ·重组工程菌株 BL21-pET30a-mpBD2 的诱导表达 | 第21页 |
| ·mpBD2 表达蛋白的纯化与检测 | 第21-24页 |
| ·目的蛋白的生物活性分析 | 第24-25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-31页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第25页 |
| ·PMD19-T-mpBD2 鉴定 | 第25-26页 |
| ·PCR 鉴定 | 第25-26页 |
| ·双酶切鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒的序列测定结果 | 第26页 |
| ·重组表达质粒PET30a-mpBD2 的鉴定结果 | 第26-28页 |
| ·PET30a-mpBD2 的PCR 鉴定结果 | 第27页 |
| ·双酶切鉴定结果 | 第27页 |
| ·测序结果鉴定 | 第27-28页 |
| ·蛋白表达及其活性检测 | 第28-31页 |
| ·目的蛋白的表达及其纯化 | 第28页 |
| ·抑菌活性的检测结果 | 第28-30页 |
| ·体外溶血活性的检测结果 | 第30-31页 |
| 5 结论与讨论 | 第31-33页 |
| 参考文献 | 第33-38页 |
| ABSTRACT | 第38-39页 |
