野大麦抗逆基因RNAi载体构建与转基因研究
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| ·研究背景 | 第11页 |
| ·文献综述 | 第11-19页 |
| ·转基因植物研究进展 | 第11-14页 |
| ·转基因植物的检测与鉴定 | 第14页 |
| ·RNA干扰技术及其应用 | 第14-16页 |
| ·植物非生物胁迫相关基因研究现状 | 第16-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-30页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·试验菌株及载体 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19-20页 |
| ·主要试验试剂与耗材 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·试验方法 | 第20-30页 |
| ·pTCK303双元表达载体构建 | 第20-26页 |
| ·农杆菌介导的野大麦遗传转化研究 | 第26-27页 |
| ·转基因野大麦分子生物学检测 | 第27-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-47页 |
| ·RNA干扰表达载体构建 | 第30-40页 |
| ·目标序列扩增 | 第30-32页 |
| ·PCR扩增引入酶切位点 | 第32-34页 |
| ·两步法构建pTCK303表达载体 | 第34-39页 |
| ·RNA干扰载体转化农杆菌EHA105感受态细胞 | 第39-40页 |
| ·野大麦遗传转化研究 | 第40-44页 |
| ·野大麦愈伤组织诱导 | 第40-41页 |
| ·农杆菌转化野大麦愈伤组织 | 第41页 |
| ·GUS野大麦愈伤组织中瞬时表达 | 第41-42页 |
| ·不同浓度的筛选压对愈伤分化率的影响 | 第42-43页 |
| ·RNA干扰载体对野大麦的转化过程 | 第43-44页 |
| ·转基因野大麦分子生物学检测 | 第44-47页 |
| ·转基因野大麦PCR检测 | 第44-45页 |
| ·转基因野大麦RT-PCR检测 | 第45页 |
| ·转基因野大麦GUS基因检测 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| ·RNA干扰及pTCK303载体的构建 | 第47-48页 |
| ·野大麦受体系统建立 | 第48页 |
| ·野大麦遗传转化效率 | 第48-49页 |
| ·野大麦遗传转化选择标记基因 | 第49-50页 |
| ·GUS报告基因的应用 | 第50页 |
| ·存在问题和今后需进一步开展的工作 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第59页 |
