| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一部分 芽孢杆菌β-折叠桶植酸酶的原核表达优化和复性研究 | 第9-45页 |
| 第一章 引言 | 第9-23页 |
| ·植酸 | 第9-10页 |
| ·植酸概述 | 第9-10页 |
| ·植酸的抗营养作用 | 第10页 |
| ·植酸酶 | 第10-23页 |
| ·植酸酶概述 | 第10-12页 |
| ·植酸酶体外合成的影响因素 | 第12-13页 |
| ·植酸酶的来源 | 第13-14页 |
| ·植酸酶的分类 | 第14-18页 |
| ·植酸酶的应用潜力 | 第18-22页 |
| ·植酸酶活性检测方法 | 第22页 |
| ·研究现状和前景 | 第22-23页 |
| 第二章 β-折叠桶植酸酶的原核表达优化和复性研究 | 第23-45页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·质粒和菌株 | 第23页 |
| ·培养基和溶液 | 第23-24页 |
| ·试剂和仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-36页 |
| ·PhyH基因序列鉴定及氨基酸序列预测 | 第24页 |
| ·PhyHT基因的引物设计 | 第24页 |
| ·质粒提取 | 第24-25页 |
| ·扩增目的基因PhyHT | 第25页 |
| ·PhyHT基因扩增产物的回收 | 第25-26页 |
| ·PhyHT基因和载体pET28b的双酶切反应 | 第26页 |
| ·PhyHT基因和载体pET28b的连接反应 | 第26页 |
| ·准备感受态细胞DH5a和BL21 | 第26-27页 |
| ·重组质粒PhyHT-pET28b的转化 | 第27页 |
| ·重组菌株DH5a-pET28b-PhyHT的筛选 | 第27-28页 |
| ·表达菌株BL21-pET28b-PhyHT的构建 | 第28页 |
| ·目的蛋白PhyHT的诱导与表达 | 第28-29页 |
| ·目的蛋白PhyHT的表达优化 | 第29页 |
| ·目的蛋白PhyHT的可溶性表达检测 | 第29-30页 |
| ·包涵体的形成及优化 | 第30页 |
| ·包涵体的变性和复性 | 第30-32页 |
| ·目的蛋白PhyHT的纯化 | 第32-34页 |
| ·目的蛋白PhyHT的活性检测 | 第34-35页 |
| ·构建PhyHT与分子伴侣的共表达体系 | 第35页 |
| ·PhyH-1和PhyH-2基因的表达 | 第35-36页 |
| ·PhyH-1和PhyH-2蛋白的晶体生长与筛选 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-45页 |
| ·PhyH序列分析 | 第36-37页 |
| ·PhyHT基因的PCR产物鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pET28b-PhyHT构建 | 第37-38页 |
| ·PhyHT的表达及诱导条件的优化 | 第38-39页 |
| ·目的蛋白PhyHT的可溶性表达检测 | 第39页 |
| ·复性目的蛋白PhyHT的可溶性检测及纯化 | 第39-40页 |
| ·植酸酶活性检测 | 第40-41页 |
| ·分子伴侣共表达系统中PhyHT的可溶性表达 | 第41-42页 |
| ·分子伴侣共表达蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·PhyH-1和PhyH-2基因的分析与表达 | 第43-44页 |
| ·PhyH-1和PhyH-2的晶体生长 | 第44-45页 |
| 第二部分 虎杖白藜芦醇合酶的表达、纯化及晶体筛选 | 第45-52页 |
| 第一章 引言 | 第45页 |
| 第二章 虎杖白藜芦醇合酶的表达、纯化及晶体学研究 | 第45-52页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·菌种和质粒 | 第45页 |
| ·常用试剂和仪器 | 第45页 |
| ·常用溶液溶液 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·PC1基因序列的测定及氨基酸序列预测 | 第46页 |
| ·PC1引物设计 | 第46页 |
| ·PC1目的基因扩增与回收 | 第46-47页 |
| ·PC1基因和载体pET22b的限制性酶切反应 | 第47页 |
| ·PC1基因和载体pET22b的连接反应 | 第47页 |
| ·菌株DH5a-pET22b-PC1的构建 | 第47页 |
| ·菌株DH5a-pET22b-PC1的筛选 | 第47-48页 |
| ·目的蛋白PC1的纯化 | 第48-49页 |
| ·晶体筛选 | 第49页 |
| ·结果与分析 | 第49-52页 |
| ·虎杖白藜芦醇合酶PC1基因分析 | 第49页 |
| ·重组质粒pET22b-PC1的构建 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白PC1的表达 | 第50-51页 |
| ·目的蛋白PC1的纯化 | 第51页 |
| ·目的蛋白PC1的晶体筛选 | 第51-52页 |
| 第三部分 讨论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 个人简介 | 第61-63页 |
| 导师简介 | 第63-65页 |
| 获得成果目录 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
