| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 环介导恒温扩增技术基本介绍 | 第11-19页 |
| 1.1 LAMP技术引物介绍 | 第11-12页 |
| 1.2 LAMP引物的设计 | 第12-13页 |
| 1.2.1 引物间的距离以及引物大小 | 第12页 |
| 1.2.2 引物的Tm值 | 第12页 |
| 1.2.3 引物碱基含量 | 第12页 |
| 1.2.4 引物末端稳定性 | 第12-13页 |
| 1.2.5 二级结构 | 第13页 |
| 1.3 LAMP技术的扩增原理 | 第13-15页 |
| 1.3.1 循环模板的合成 | 第13-14页 |
| 1.3.2 循环扩增阶段 | 第14-15页 |
| 1.3.3 伸长与再循环阶段 | 第15页 |
| 1.4 LAMP方法的特点 | 第15-16页 |
| 1.5 经典LAMP体系的建立 | 第16页 |
| 1.6 LAMP扩增产物可视化检测 | 第16-19页 |
| 1.6.1 沉淀观测法 | 第17页 |
| 1.6.2 显色观察法 | 第17-18页 |
| 1.6.3 凝胶电泳观察法 | 第18-19页 |
| 2 LAMP病原体检测在国内外的应用 | 第19-23页 |
| 2.1 细菌的检测 | 第19-20页 |
| 2.2 病毒的检测 | 第20-21页 |
| 2.3 寄生虫的检测 | 第21-22页 |
| 2.4 胚胎性别鉴定方面的应用 | 第22页 |
| 2.5 LAMP在其他方面的应用 | 第22-23页 |
| 3 小结 | 第23-24页 |
| 引言 | 第24-25页 |
| 试验一 犊牛腹泻沙门氏菌LAMP检测体系的优化 | 第25-40页 |
| 1 材料与方法 | 第25-32页 |
| 1.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 1.1.1 菌液 | 第25页 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 | 第25-26页 |
| 1.2 试验方法 | 第26-27页 |
| 1.2.1 菌种的处理 | 第26页 |
| 1.2.2 细菌DNA模板的处理 | 第26-27页 |
| 1.3 LAMP反应和PCR反应的建立 | 第27-32页 |
| 1.3.1 LAMP引物设计 | 第27-28页 |
| 1.3.2 经典LAMP体系和PCR体系的建立 | 第28-30页 |
| 1.3.3 LAMP反应体系的优化 | 第30-31页 |
| 1.3.3.1 反应温度的优化 | 第30页 |
| 1.3.3.2 Mg2+浓度的优化 | 第30页 |
| 1.3.3.3 dNTPs浓度的优化 | 第30-31页 |
| 1.3.3.4 Bst酶浓度的优化 | 第31页 |
| 1.3.3.5 内外引物浓度比的优化 | 第31页 |
| 1.3.3.6 LAMP特异性检测 | 第31页 |
| 1.3.3.7 LAMP灵敏度检测 | 第31页 |
| 1.3.4 LAMP扩增产物的分析 | 第31-32页 |
| 1.3.4.1 白色沉淀法 | 第31页 |
| 1.3.4.2 SYBR Green I染色法 | 第31页 |
| 1.3.4.3 琼脂糖凝胶电泳法 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-36页 |
| 2.1 LAMP反应体系的优化结果与分析 | 第32-36页 |
| 2.1.1 LAMP反应温度的优化 | 第32页 |
| 2.1.2 LAMP镁离子浓度的优化 | 第32-33页 |
| 2.1.3 LAMP DntpS浓度的优化 | 第33页 |
| 2.1.4 LMAP Bst聚合酶浓度的优化 | 第33-34页 |
| 2.1.5 LAMP内外引物浓度比的优化 | 第34-35页 |
| 2.1.6 LAMP沙门氏菌特异性检测 | 第35页 |
| 2.1.7 LAMP沙门氏菌灵敏度检测 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 3.1 建立LAMP体系时出现的问题 | 第36-37页 |
| 3.2 LAMP最优反应体系的确立 | 第37-38页 |
| 3.3 LAMP可视化检测方法的比较 | 第38页 |
| 4 小结 | 第38-40页 |
| 试验二 犊牛腹泻BVD病毒RT-LAMP检测体系的优化 | 第40-51页 |
| 1 实验材料 | 第40-41页 |
| 1.1 病料采集 | 第40-41页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第41页 |
| 2 试验方法 | 第41-45页 |
| 2.1 病料的处理 | 第41页 |
| 2.2 毒液RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.3 BVD病毒RT-LAMP检测体系和RT-PCR体系的建立及优化 | 第42-45页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第42页 |
| 2.3.2 经典RT-LAMP体系和RT-PCR体系的建立 | 第42-44页 |
| 2.3.3 RT-LAMP反应体系的优化 | 第44-45页 |
| 2.3.3.1 RT-LAMP扩增体系组分的优化 | 第44页 |
| 2.3.3.2 RT-LAMP特异性检测 | 第44-45页 |
| 2.3.3.3 RT-LAMP灵敏度检测 | 第45页 |
| 2.3.3.4 反应温度的优化 | 第45页 |
| 2.3.4 LAMP扩增产物的分析 | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-49页 |
| 3.1 LAMP反应体系的优化 | 第45-49页 |
| 3.1.1 LAMP反应温度的优化 | 第45页 |
| 3.1.2 LAMP镁离子浓度的优化 | 第45-46页 |
| 3.1.3 LAMP dNTPs浓度的优化 | 第46-47页 |
| 3.1.4 LAMP Bst聚合酶浓度的优化 | 第47页 |
| 3.1.5 LAMP内外引物浓度比的优化 | 第47-48页 |
| 3.1.6 LAMP病毒性腹泻病毒特异性检测 | 第48-49页 |
| 3.1.7 LAMP病毒性腹泻病毒灵敏度检测 | 第49页 |
| 4 小结 | 第49-51页 |
| 试验三 LAMP检测体系的初步应用 | 第51-57页 |
| 1 试验材料与方法 | 第51-52页 |
| 1.1 主要试剂和仪器 | 第51页 |
| 1.2 主要溶液的配置 | 第51-52页 |
| 1.3 样本的处理与检测 | 第52页 |
| 2 其他病原体LAMP检测 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-56页 |
| 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| Abstract | 第64-65页 |
