| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 符号表（缩略语表) | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 文章综述 | 第16-24页 |
| 1 脂肪酸结合蛋白家族(FABPs)概述 | 第16-18页 |
| ·脂肪酸结合蛋白(FABPs)的发现及命名 | 第16页 |
| ·脂肪酸结合蛋白(FABPs)基本结构 | 第16-17页 |
| ·脂肪酸结合蛋白(FABPs)主要生物学功能 | 第17-18页 |
| 2 心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)研究进展 | 第18-22页 |
| ·心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基本结构 | 第19页 |
| ·心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)主要生物学功能 | 第19-20页 |
| ·心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)主要测定方法 | 第20-21页 |
| ·心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)的临床应用 | 第21页 |
| ·心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)在改善肉品质和遗传育种中的应用 | 第21-22页 |
| 3 徐淮山羊(Xu huai Goat) | 第22-23页 |
| 4 转基因技术(Transgenic Technology)和转基因动物(Transgenic Animals) | 第23页 |
| 5 小鼠(Mouse) | 第23-24页 |
| 第二章 徐淮山羊H-FABP基因克隆及其生物信息学分析 | 第24-38页 |
| 1 材料与方法 | 第24-30页 |
| ·材料与试剂 | 第24-26页 |
| ·菌种和质粒来源 | 第24-25页 |
| ·引物、工具酶及试剂 | 第25页 |
| ·其他常用试剂配制 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·徐淮山羊心脏型脂肪酸结合蛋白基因克隆及鉴定 | 第26-29页 |
| ·徐淮山羊心脏组织总RNA提取 | 第26页 |
| ·徐淮山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因cDNA的扩增 | 第26-27页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第27-28页 |
| ·菌液PCR扩增目的基因 | 第28页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·去除内毒素 | 第29页 |
| ·酶切鉴定 | 第29页 |
| ·H-FABP基因生物信息学分析 | 第29-30页 |
| ·H-FABP基因序列测定及同源性分析 | 第29页 |
| ·H-FABP蛋白疏水性分析 | 第29-30页 |
| ·H-FABP蛋白信号肽预测 | 第30页 |
| ·H-FABP蛋白糖基化和磷酸化位点预测 | 第30页 |
| ·H-FABP蛋白质功能结构域预测 | 第30页 |
| ·H-FABP亚细胞定位预测 | 第30页 |
| ·H-FABP蛋白质二级结构预测 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-37页 |
| ·H-FABP基因的克隆 | 第30-32页 |
| ·H-FABP基因生物信息学分析结果 | 第32-37页 |
| ·徐淮山羊H-FABP基因序列分析及不同物种同源性比较结果 | 第32-33页 |
| ·徐淮山羊H-FABP蛋白疏水性分析结果 | 第33-34页 |
| ·H-FABP蛋白信号肽预测结果 | 第34页 |
| ·H-FABP蛋白糖基化和磷酸化位点预测结果 | 第34-35页 |
| ·H-FABP蛋白质功能结构域预测结果 | 第35-36页 |
| ·H-FABP亚细胞定位预测结果 | 第36页 |
| ·H-FABP蛋白质二级结构预测结果 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-38页 |
| 第三章 真核表达载体构建及H-FABP蛋白亚细胞定位研究 | 第38-50页 |
| 1 材料和方法 | 第38-45页 |
| ·材料与试剂 | 第38-40页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·引物、工具酶及试剂 | 第38-39页 |
| ·其他常用试剂配制 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-45页 |
| ·真核表达载体构建 | 第40页 |
| ·鼠抗徐淮山羊H-FABP基因多克隆抗体的制备及鉴定 | 第40-42页 |
| ·鼠抗徐淮山羊H-FABP基因多克隆抗体的制备 | 第40-41页 |
| ·徐淮山羊胎儿成纤维细胞(GEF)的分离培养 | 第41-42页 |
| ·细胞转染重组质粒pcDNA3.1-H-FABP及阳性细胞的筛选 | 第42页 |
| ·利用间接免疫荧光(IFA)对多克隆抗体进行鉴定 | 第42页 |
| ·徐淮山羊H-FABP蛋白亚细胞定位及后期检测 | 第42-45页 |
| ·重组质粒pEGFP-H-FABP转染徐淮山羊胎儿成纤维细胞(GEF) | 第42-43页 |
| ·融合表达产物中H-FABP mRNA的RT-PCR检测 | 第43页 |
| ·融合表达产物Western blot检测 | 第43-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-48页 |
| ·真核载体构建 | 第45页 |
| ·徐淮山羊胎儿成纤维细胞(GEF)的分离培养 | 第45-46页 |
| ·IFA鉴定多克隆抗体效价 | 第46页 |
| ·徐淮山羊H-FABP蛋白亚细胞定位 | 第46-47页 |
| ·融合表达产物中H-FABP的RT-PCR检测 | 第47-48页 |
| ·融合表达产物Western blot检测 | 第48页 |
| 3. 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 睾丸注射法制备携带山羊H-FABP基因的转基因小鼠 | 第50-65页 |
| 1 材料与方法 | 第51-56页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·受试动物及载体 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·其他常用试剂配制 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-56页 |
| ·重组质粒转染NIH-3T3细胞 | 第52页 |
| ·徐淮山羊H-FABP蛋白在小鼠体内暂态表达检测 | 第52页 |
| ·小鼠尾静脉注射重组质粒 | 第52页 |
| ·小鼠组织冰冻切片检测目的基因的表达 | 第52页 |
| ·睾丸注射法制备转基因小鼠 | 第52-56页 |
| ·睾丸注射重组质粒 | 第52-53页 |
| ·睾丸组织冰冻切片和精子荧光检测 | 第53页 |
| ·检测目的基因在G0代中表达情况 | 第53-54页 |
| ·检测目的蛋白在G0代中的表达情况 | 第54-55页 |
| ·检测目的基因在G1代中的表达情况 | 第55页 |
| ·子代肌间脂肪含量检测 | 第55-56页 |
| 2 结果 | 第56-62页 |
| ·重组质粒转染小鼠成纤维细胞(NIH-3T3)的检测结果 | 第56页 |
| ·尾静脉注射小鼠冰冻组织切片荧光检测 | 第56-57页 |
| ·睾丸注射后组织冰冻切片荧光检测结果 | 第57页 |
| ·睾丸注射后精子涂片荧光检测结果 | 第57-58页 |
| ·精子DNA检测 | 第58页 |
| ·G0代小鼠荧光检测 | 第58页 |
| ·G0代小鼠DNA水平检测 | 第58-59页 |
| ·G0代小鼠蛋白水平检测 | 第59页 |
| ·G1代小鼠DNA水平检测 | 第59-60页 |
| ·G1代小鼠蛋白水平检测 | 第60-61页 |
| ·G0代和G1代肌间脂肪含量检测结果 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| 第五章 显微注射法和睾丸注射法制备携带徐淮山H-FABP基因的转基因羊 | 第65-78页 |
| 1 材料和方法 | 第66-71页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-71页 |
| ·显微注射法制备转基因羊 | 第67-70页 |
| ·重组质粒的制备 | 第67页 |
| ·重组质粒转染波尔山羊成纤维细胞 | 第67-68页 |
| ·卵丘卵母细胞复合体(COCs)的获得及体外成熟 | 第68页 |
| ·成熟卵母细胞的去核 | 第68-69页 |
| ·供体细胞的准备 | 第69页 |
| ·核移植、电融合及克隆胚的激活 | 第69页 |
| ·重构胚胎移植 | 第69页 |
| ·显微注射子代转基因羊检测 | 第69-70页 |
| ·睾丸注射法制备转基因羊 | 第70-71页 |
| ·重组质粒的大量制备 | 第70页 |
| ·睾丸注射重组质粒 | 第70-71页 |
| ·睾丸注射子代转基因羊检测 | 第71页 |
| 2 结果 | 第71-76页 |
| ·转染重组质粒阳性细胞的获得 | 第71-72页 |
| ·成熟卵母细胞的获取 | 第72页 |
| ·显微注射 | 第72-73页 |
| ·G0代目的基因及目的蛋白检测 | 第73-75页 |
| ·睾丸注射法制备转基因羊G0代检测 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| 全文结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 附录 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第88-89页 |
