| 致谢 | 第1-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 病原学 | 第12页 |
| 2 PRRSV 的分子生物学特性 | 第12-14页 |
| ·PRRSV 基因组特征 | 第12-13页 |
| ·PRRSV 主要蛋白的作用 | 第13-14页 |
| 3 PRRSV 检测方法 | 第14-18页 |
| ·病原学方法 | 第15页 |
| ·血清学方法 | 第15-16页 |
| ·间接免疫荧光（IFA） | 第15页 |
| ·免疫过氧化物酶单层细胞实验（IPMA） | 第15页 |
| ·酶联免疫吸附实验（ELISA） | 第15-16页 |
| ·血清中和实验（SNT） | 第16页 |
| ·乳胶凝集实验（LAT） | 第16页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第16页 |
| ·分子生物学诊断 | 第16-18页 |
| ·实时荧光定量 PCR（RT-PCR） | 第17页 |
| ·核酸探针原位杂交（ISH） | 第17页 |
| ·基因芯片（Gene chip） | 第17页 |
| ·环介导等温扩增反应（LAMP） | 第17-18页 |
| 4 PRRSV 疫苗 | 第18-19页 |
| 5 PRRSV 与病毒感染的抗体依赖增强作用(ADE) | 第19-20页 |
| 6 PRRSV 的抗原表位 | 第20-21页 |
| 7 本研究的意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 PRRSV-GP5 截短蛋白的表达与纯化 | 第22-43页 |
| 1 引言 | 第22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·病毒、菌株及载体 | 第22页 |
| ·酶及主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·引物设计与合成 | 第25-26页 |
| ·OE-PCR 扩增 | 第26-28页 |
| ·重组质粒 pET-GP5 的构建 | 第28-31页 |
| ·质粒 DNA 的制备 | 第28页 |
| ·PCR 产物及双酶切产物的回收纯化 | 第28-29页 |
| ·重组 GP5 基因的双酶切 | 第29页 |
| ·pET28a(+)载体的双酶切 | 第29-30页 |
| ·GP5 与 pET28a(+)双酶切产物的连接 | 第30页 |
| ·重组质粒 pET-GP5 构建图谱 | 第30页 |
| ·重组质粒 pET-GP5 的转化 | 第30-31页 |
| ·阳性重组质粒 pET-GP5 的筛选与鉴定 | 第31页 |
| ·PRRSV-GP5 截短蛋白的原核表达及检测 | 第31-35页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第31页 |
| ·Western blot 分析 | 第31-32页 |
| ·包涵体的纯化与复性 | 第32-33页 |
| ·包涵体的制备 | 第32页 |
| ·重组蛋白的过柱纯化 | 第32页 |
| ·包涵体的复性 | 第32-33页 |
| ·酶联免疫吸附实验（ELISA） | 第33页 |
| ·BALB/c 小鼠免疫 | 第33-34页 |
| ·免疫过氧化物酶单层细胞实验（IPMA） | 第34页 |
| ·间接免疫荧光（IFA） | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-42页 |
| ·PRRSV-GP5 蛋白分子特征分析结果 | 第35页 |
| ·OE-PCR 扩增结果 | 第35-36页 |
| ·PRRSV-GP5 截短蛋白的诱导表达 | 第36-39页 |
| ·重组 PRRSV-GP5 截短蛋白的诱导表达条件优化 | 第36-38页 |
| ·重组 PRRSV-GP5 截短蛋白表达的 IPTG 浓度优化 | 第37页 |
| ·重组 PRRSV-GP5 截短蛋白的不同温度诱导表达 | 第37-38页 |
| ·重组 PRRSV-GP5 截短蛋白的不同时间诱导表达 | 第38页 |
| ·重组 PRRSV-GP5 截短蛋白的可溶性鉴定 | 第38-39页 |
| ·PRRSV-GP5 截短蛋白免疫原性的 ELISA 鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·PRRSV-GP5 截短蛋白免疫原性的 IPMA 鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·PRRSV-GP5 截短蛋白免疫原性的 IFA 鉴定结果 | 第41-42页 |
| 4 结论与讨论 | 第42-43页 |
| 第三部分 PRRSV 抗体间接 ELISA 检测方法的建立 | 第43-52页 |
| 1 引言 | 第43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·ELISA 常规操作流程 | 第43-44页 |
| ·ELISA 检测条件优化 | 第44-46页 |
| ·重组 PRRSV-GP5 截短蛋白抗原最佳包被浓度的确定 | 第44页 |
| ·最佳血清稀释度的确定 | 第44页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第44-45页 |
| ·一抗血清最佳反应时间的确定 | 第45页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第45页 |
| ·重组抗原包被条件的确定 | 第45页 |
| ·封闭液的选择 | 第45页 |
| ·显色时间的确定 | 第45页 |
| ·间接 ELISA 临界值的确定 | 第45-46页 |
| ·特异性实验 | 第46页 |
| ·重复性实验 | 第46页 |
| ·临床血清样品检测 | 第46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-50页 |
| ·最佳抗原包被浓度、最佳血清及酶标二抗稀释度的确定 | 第46-47页 |
| ·待检血清及酶标二抗最佳反应时间的确定 | 第47页 |
| ·最佳包被条件及封闭条件的确定 | 第47-48页 |
| ·最佳显色时间的确定 | 第48-49页 |
| ·ELISA 临界值的确定结果 | 第49页 |
| ·特异性实验结果 | 第49-50页 |
| ·重复性实验结果 | 第50页 |
| ·临床血清检测结果 | 第50页 |
| 4 结论与讨论 | 第50-52页 |
| 第四部分 全文总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录 | 第58页 |
