| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-16页 |
| ·研究背景 | 第7-10页 |
| ·细胞因子 | 第7-8页 |
| ·白介素家族与IL-11 | 第8页 |
| ·IL-11 的生物学作用及临床作用 | 第8-10页 |
| ·长效药物与长效IL-11 的研究 | 第10-12页 |
| ·构建长效药物的途径 | 第10-11页 |
| ·长效IL-11 的途径 | 第11-12页 |
| ·长效药物未来市场的展望 | 第12页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第12-14页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的开发及利用 | 第12页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的优势及不足 | 第12-13页 |
| ·几种毕赤酵母表达系统宿主菌及表达载体 | 第13页 |
| ·提高外源蛋白表达量的几种策略 | 第13-14页 |
| ·本课题研究基础和内容 | 第14-16页 |
| ·课题的研究基础和主要问题 | 第14-15页 |
| ·研究思路和内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-23页 |
| ·材料与方法 | 第16-17页 |
| ·菌种 | 第16页 |
| ·试剂与仪器 | 第16-17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·培养方法 | 第17-23页 |
| ·G418 抗性平板筛选高拷贝重组子 | 第17-18页 |
| ·免疫学方法的建立 | 第18-19页 |
| ·高表达菌株western blot 检测 | 第19页 |
| ·毕赤酵母工程菌摇瓶表达HSA-IL-11 单因素优化 | 第19-20页 |
| ·5 L 及30 L 发酵罐发酵条件的建立 | 第20-21页 |
| ·融合蛋白HSA-IL-11 的分离纯化 | 第21页 |
| ·分析与测定方法 | 第21-22页 |
| ·HSA-IL-11 生物学活性鉴定 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-43页 |
| ·融合基因的转化 | 第23-24页 |
| ·线性化重组质粒pPIC9K-HSA-IL-11 的获得 | 第23页 |
| ·影响电转化效率的几个因素 | 第23-24页 |
| ·转化子的筛选 | 第24-29页 |
| ·先使用HSA 抗体筛选再使用IL-11 抗体复筛 | 第24页 |
| ·先使用IL-11 抗体筛选再使用HSA 抗体复筛 | 第24-25页 |
| ·不同显色强度菌株表达量的测定 | 第25-26页 |
| ·高表达菌株的western blot 鉴定 | 第26-27页 |
| ·G418 抗性平板得菌株表达量的测定以及与免疫法的比较 | 第27-28页 |
| ·GS115-HSA-IL-11 和SMD1168-HSA-IL-11 高表达重组子的筛选 | 第28-29页 |
| ·摇床培养条件研究 | 第29-31页 |
| ·重组菌的生长曲线及表达曲线 | 第29-30页 |
| ·工程菌表达HSA-IL-11 诱导条件的单因素分析 | 第30-31页 |
| ·发酵罐培养条件的研究 | 第31-38页 |
| ·不同氮源对工程菌的生长及表达的影响 | 第31-34页 |
| ·不同甲醇流加方式对工程菌的生长及表达的影响 | 第34-36页 |
| ·不同诱导pH 值对工程菌的生长及表达的影响 | 第36页 |
| ·不同诱导温度对工程菌生长及表达的影响 | 第36-38页 |
| ·HSA-IL-11 的分离纯化 | 第38-42页 |
| ·发酵液的超滤层析 | 第38-39页 |
| ·染料亲和层析 | 第39页 |
| ·疏水作用层析 | 第39-40页 |
| ·阳离子交换柱 | 第40-41页 |
| ·纯化步骤总结 | 第41-42页 |
| ·纯化后融合蛋白的western blot 鉴定及银染结果 | 第42页 |
| ·融合蛋白HSA-IL-11 的生物学活性测定 | 第42-43页 |
| 结论与展望 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
