| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 盾壳霉简介 | 第11-12页 |
| ·盾壳霉的生物学特征 | 第11页 |
| ·盾壳霉的生防机制 | 第11-12页 |
| 2 小RNA简介 | 第12-14页 |
| ·小RNA的特征 | 第12页 |
| ·小RNA的功能 | 第12-14页 |
| 3 小RNA相关通路基因的研究 | 第14-18页 |
| ·Dicer及其相关研究 | 第14-16页 |
| ·Dicer的结构 | 第14页 |
| ·Dicer的功能 | 第14-16页 |
| ·AGO的研究 | 第16-18页 |
| ·AGO蛋白家族 | 第16页 |
| ·AGO蛋白的功能 | 第16-18页 |
| 4 选题的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 盾壳霉AGO、DCL1和DCL2基因的功能验证 | 第19-50页 |
| 1 材料和方法 | 第19-35页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·菌株、载体 | 第19页 |
| ·培养基、试剂 | 第19-20页 |
| ·抗生素 | 第20页 |
| ·杂交药品 | 第20-21页 |
| ·试剂盒 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-35页 |
| ·小RNA相关通路基因在盾壳霉的表达情况 | 第21-22页 |
| ·盾壳霉总RNA提取 | 第21页 |
| ·RNA反转录合成cDNA第一链 | 第21-22页 |
| ·基因敲除载体的构建 | 第22-26页 |
| ·CmDCL2基因敲除载体的构建 | 第22-24页 |
| ·CmAGO、CmDCL1基因敲除载体的构建 | 第24-26页 |
| ·含重组质粒农杆菌的获取和转化 | 第26-27页 |
| ·含重组质粒农杆菌的获取 | 第26页 |
| ·农杆菌介导敲除载体转化盾壳霉ZS-1 | 第26-27页 |
| ·敲除转化子的PCR和RT-PCR鉴定 | 第27页 |
| ·敲除转化子的Southern杂交鉴定 | 第27-30页 |
| ·基因组DNA的大量提取 | 第27-28页 |
| ·基因组DNA酶切 | 第28页 |
| ·电泳、转膜及固定 | 第28-29页 |
| ·预杂交 | 第29页 |
| ·探针的标记和杂交 | 第29-30页 |
| ·洗膜、压片及探针的洗脱 | 第30页 |
| ·互补载体的构建 | 第30-31页 |
| ·含重组质粒农杆菌的获取和转化 | 第31页 |
| ·含重组质粒农杆菌的获取 | 第31页 |
| ·农杆菌介导互补载体转化CmAGO-KO117、CmDCL1-KO12和CmDCL2-KO100菌株 | 第31页 |
| ·互补转化子的PCR和RT-PCR鉴定 | 第31-32页 |
| ·转化子的生物学性状测定 | 第32-35页 |
| ·转化子菌落形态观察 | 第32页 |
| ·转化子菌丝显微观察 | 第32页 |
| ·转化子孢子形态观察 | 第32页 |
| ·转化子菌丝生长速度测定 | 第32页 |
| ·转化子产孢量检测 | 第32-33页 |
| ·转化子孢子萌发试验 | 第33页 |
| ·转化子寄生致腐核盘菌菌核能力的检测 | 第33页 |
| ·转化子与核盘菌菌株Ep-1PNA367的对峙培养试验 | 第33-34页 |
| ·转化子产抗真菌物质的测定 | 第34页 |
| ·转化子与Bc-10HN454菌株对峙培养 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-50页 |
| ·CmAGO、CmDCL1和CmDCL2的表达检测 | 第35-36页 |
| ·敲除载体的鉴定 | 第36页 |
| ·敲除转化子的PCR验证及表达量检测 | 第36-37页 |
| ·敲除转化子的Southern Blot验证 | 第37-38页 |
| ·CmDCL2互补载体的鉴定 | 第38-39页 |
| ·CmDCL2互补载体的大肠杆菌菌液测序结果 | 第38页 |
| ·CmDCL2互补载体的农杆菌菌液PCR验证 | 第38-39页 |
| ·CmDCL2互补转化子的PCR验证及表达量检测 | 第39-40页 |
| ·CmDCL2互补转化子的PCR鉴定 | 第39页 |
| ·CmDCL2互补转化子的RT-PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·转化子的生物学性状测定 | 第40-50页 |
| ·转化子的菌落形态观察 | 第40-41页 |
| ·转化子的菌丝形态观察 | 第41页 |
| ·转化子的孢子形态观察 | 第41-42页 |
| ·转化子的菌丝生长速度测定 | 第42页 |
| ·转化子的产孢能力测定 | 第42-43页 |
| ·转化子孢子萌发速率的测定 | 第43-44页 |
| ·转化子寄生致腐核盘菌菌株Ep-1PNA367能力测定 | 第44-46页 |
| ·转化子与核盘菌Ep-1PNA367对峙培养试验 | 第46页 |
| ·转化子抗真菌物质的能力测定 | 第46-47页 |
| ·转化子与Bc-10HN454菌株对峙培养 | 第47-50页 |
| 第三章 结论与展望 | 第50-53页 |
| 1 讨论 | 第50-51页 |
| 2 结论与展望 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
