| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词表 | 第7-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第11-12页 |
| ·多不饱和脂肪酸DHA和EPA的生理功能及不良影响 | 第12-14页 |
| ·DHA和EPA的生理功能 | 第12-13页 |
| ·支持和维护脑和视网膜的功能及延缓脑衰老 | 第12页 |
| ·预防和治疗心脑血管疾病 | 第12-13页 |
| ·抑制肿瘤发生和生长 | 第13页 |
| ·抑制和治疗过敏等炎症反应 | 第13页 |
| ·DHA和EPA的不良影响 | 第13-14页 |
| ·DHA和EPA合成的机制 | 第14-16页 |
| ·△4去饱和酶 | 第15-16页 |
| ·△5延长酶 | 第16页 |
| ·从微藻中获得DHA和EPA | 第16-17页 |
| ·真菌发酵生产DHA和EPA | 第17-18页 |
| ·展望 | 第18-19页 |
| 第2章 目的基因的改构及重组质粒载体的构建 | 第19-43页 |
| ·材料 | 第19-23页 |
| ·细菌菌株及载体 | 第19页 |
| ·引物 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20-22页 |
| ·基础酶与试剂 | 第20-21页 |
| ·溶液配制 | 第21页 |
| ·细菌培养基 | 第21-22页 |
| ·主要耗材和仪器 | 第22-23页 |
| ·主要分析软件 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·基因改构 | 第23页 |
| ·转化 | 第23-24页 |
| ·接菌 | 第24页 |
| ·质粒提取(利用promega公司的高纯度质粒小提试剂盒) | 第24页 |
| ·DNA片段纯化(TAKARA) | 第24-25页 |
| ·凝胶回收 | 第25页 |
| ·载体构建 | 第25-27页 |
| ·构建pcaggs-neo-△4载体 | 第25-27页 |
| ·构建pcaggs-hygro-△5载体 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-39页 |
| ·密码子改构的结果与分析 | 第27-31页 |
| ·重组子pcaggs-neo-△4的PCR鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·酶切鉴定插入目的片段△4的正反 | 第32页 |
| ·重组子pcaggs-neo-△4中△4片段序列测定与分析结果 | 第32-33页 |
| ·pcaggs-neo-△4构建过程示意图 | 第33页 |
| ·重组质粒pcaggs-hygro的PCR阳性鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·酶切验证重组质粒pcaggs-hygro中连入的抗性基因hygro的正反向 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pcaggs-hygro的序列测定与分析结果 | 第35页 |
| ·重组质粒pcaggs-hygro-△5的△5 PCR阳性鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·酶切验证重组质粒pcaggs-hygro-△5中连入的目的基因△5的正反向 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pcaggs-hygro-△5中△5的序列测定与分析结果 | 第37页 |
| ·pcaggs hygro-△5构建过程 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-43页 |
| 第3章 细胞株的构建 | 第43-53页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·细胞 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43-44页 |
| ·生化与分子生物学试剂 | 第43页 |
| ·溶液及细胞培养基配制 | 第43-44页 |
| ·主要耗材和仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·CHOK1细胞的培养 | 第44-45页 |
| ·冻存CHOK1细胞(以一个5ml的细胞培瓶中的细胞为例) | 第44-45页 |
| ·复苏CHO-K1细胞 | 第45页 |
| ·脂质体转染质粒DNA | 第45-46页 |
| ·挑选单克隆的优化 | 第46页 |
| ·提取稳定共转染细胞总RNA | 第46-47页 |
| ·反转录获得cDNA | 第47页 |
| ·RT-RCR检测 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-51页 |
| ·CHOK1细胞药敏实验 | 第48-49页 |
| ·CHOK1细胞对G418敏感性检测 | 第48页 |
| ·CHOK1细胞对潮霉素B的敏感性检测 | 第48-49页 |
| ·筛选单克隆 | 第49页 |
| ·RT-RCR检测结果 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第4章 脂肪酸的测定分析 | 第53-59页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·生化与分子生物学试剂 | 第53页 |
| ·溶液及细胞培养基配制 | 第53页 |
| ·主要耗材和仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-55页 |
| ·扩增细胞,添加诱导底物EPA | 第54页 |
| ·抽提细胞株脂肪酸并进行甲酯化 | 第54-55页 |
| ·结果 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第5章 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第71页 |
