| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-44页 |
| ·HBV及其相关的疾病 | 第14-24页 |
| ·HBV分子生物学及其研究进展 | 第14-21页 |
| ·HBV基因组结构及其功能特点 | 第15页 |
| ·HBV的复制和转录 | 第15-18页 |
| ·HBV编码蛋白的结构及其功能 | 第18-21页 |
| ·囊膜蛋白 | 第18-19页 |
| ·病毒核心蛋白及e抗原 | 第19-20页 |
| ·病毒的P蛋白 | 第20页 |
| ·HBx蛋白 | 第20-21页 |
| ·肝脏是嗜肝DNA病毒感染的靶器官 | 第21-24页 |
| ·肝细胞生长和细胞凋亡相关的生长因子和细胞因子 | 第21-23页 |
| ·肝细胞凋亡、增殖和再生相关的信号转导途径 | 第23-24页 |
| ·HCC的分子病理学 | 第24-31页 |
| ·HBV病毒基因在HCC形成过程中的作用 | 第27-28页 |
| ·HBx在HCC形成过程中的作用 | 第28-31页 |
| ·HBx蛋白及相关细胞蛋白的研究进展 | 第31-43页 |
| ·HBx的表达与调控 | 第31页 |
| ·HBx蛋白及其相互作用蛋白质 | 第31-33页 |
| ·受HBx蛋白调控的基因或蛋白质 | 第33-35页 |
| ·HBx蛋白参与调控的细胞信号转导途径 | 第35-39页 |
| ·HBx激活蛋白激酶C | 第35-36页 |
| ·HBx上调NF-κB | 第36-37页 |
| ·HBx激活Ras-raf-MAPK信号盒 | 第37-38页 |
| ·HBx激活应激激活蛋白激酶和Jun N-末端激酶途径 | 第38-39页 |
| ·HBx激活蛋白激酶B(PKB/Akt)途径 | 第39页 |
| ·HBx蛋白上调Janus激酶/STAT途径 | 第39页 |
| ·HBx蛋白与肝细胞凋亡 | 第39-43页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第43-44页 |
| 第二章 HBV基因组的克隆及其遗传演化分析 | 第44-56页 |
| ·材料与方法 | 第44-46页 |
| ·血清 | 第44页 |
| ·菌种、质粒 | 第44页 |
| ·HBV基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·HBV全基因组的扩增 | 第45页 |
| ·PCR产物的回收 | 第45页 |
| ·HBV基因组DNA的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·HBV全基因组与T载体的连接 | 第45页 |
| ·连接产物的电转化 | 第45-46页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·电转化 | 第45-46页 |
| ·质粒的提取 | 第46页 |
| ·重组质粒pGEM-HBV的酶切鉴定 | 第46页 |
| ·HBV核苷酸序列测定 | 第46页 |
| ·HBV的序列分析 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-54页 |
| ·HBV全基因组PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·HBV基因组DNA的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pGEM-HBV的酶切鉴定 | 第48页 |
| ·HBV全基因组核苷酸序列测定及其遗传演化分析 | 第48-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 HBx基因相关载体的构建及其鉴定 | 第56-66页 |
| ·材料与方法 | 第56-58页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·HBx和HBs基因的扩增 | 第56-57页 |
| ·HBx和HBs PCR产物纯化、连接及转化 | 第57页 |
| ·重组质粒pGBKT7-x和pGBKT7-HBs酶切鉴定 | 第57页 |
| ·重组质粒pGBKT7-x和pGBKT7-HBs核苷酸序列测定 | 第57页 |
| ·HBx基因的核苷酸序列分析 | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-64页 |
| ·PCR扩增HBx和HBs基因 | 第58-59页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组质粒pGBKT7-HBx和pGBKT7-HBs核苷酸序列测定 | 第60-61页 |
| ·HBx基因的核苷酸序列及其遗传演化分析 | 第61-63页 |
| ·HBx蛋白基因表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 HBx相互作用细胞蛋白基因的筛选 | 第66-87页 |
| ·材料与方法 | 第68-72页 |
| ·酵母双杂交系统预制文库 | 第68页 |
| ·pGBKT7-x的酵母转化 | 第68-69页 |
| ·酵母菌AH109的培养及其表型鉴定 | 第68页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第68-69页 |
| ·酵母的转化 | 第69页 |
| ·阳性菌株表型鉴定 | 第69-70页 |
| ·转化菌落的表型鉴定 | 第69-70页 |
| ·HBx对酵母的毒性测试 | 第70页 |
| ·HBx基因转录自激活测试 | 第70页 |
| ·预制文库的筛选 | 第70-71页 |
| ·HBx Bait酵母菌株的培养及其增菌 | 第70页 |
| ·Mating试验 | 第70页 |
| ·Mating试验中菌落转移及纯化 | 第70-71页 |
| ·酵母菌质粒的提取 | 第71页 |
| ·酵母菌质粒的转化 | 第71页 |
| ·AD质粒的提取及鉴定 | 第71-72页 |
| ·AD质粒和Bait质粒pGBKT7—HBx共转化 | 第72页 |
| ·AD片段的序列测定 | 第72页 |
| ·结果 | 第72-85页 |
| ·酵母菌的表型鉴定 | 第72-73页 |
| ·HBx蛋白对酵母的毒性测试 | 第73页 |
| ·HBx基因转录自激活测试 | 第73页 |
| ·Mating试验 | 第73-75页 |
| ·阳性克隆的鉴定及其分析 | 第75-84页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第75-79页 |
| ·阳性克隆的PCR产物的酶切鉴定 | 第79-82页 |
| ·阳性克隆AD质粒的提取及鉴定 | 第82-84页 |
| ·阳性克隆的核苷酸序列测定及其序列分析 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| 第五章 阳性克隆的体外体内鉴定 | 第87-102页 |
| ·材料与方法 | 第87-93页 |
| ·材料 | 第87页 |
| ·体外翻译 | 第87-88页 |
| ·AD片段编码区体外翻译模板的扩增及其纯化 | 第87页 |
| ·Bait蛋白HBx体外翻译 | 第87-88页 |
| ·AD蛋白体外翻译 | 第88页 |
| ·免疫沉淀及其检测 | 第88页 |
| ·HBx蛋白与其相互作用蛋白免疫荧光共定位 | 第88-92页 |
| ·相关基因表达载体的构建 | 第88-92页 |
| ·细胞培养及转染 | 第92页 |
| ·免疫荧光标记及其检测 | 第92页 |
| ·体内免疫共沉淀试验 | 第92-93页 |
| ·结果 | 第93-101页 |
| ·AD片段编码区体外翻译模板的扩增 | 第93-94页 |
| ·免疫沉淀及其检测 | 第94页 |
| ·HBx蛋白和AD蛋白免疫共定位研究相关基因表达载体的构建 | 第94-99页 |
| ·HBx蛋白与其相互作用蛋白免疫荧光共定位试验 | 第99-100页 |
| ·HBx蛋白与其相互作用蛋白免疫共沉淀试验 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101-102页 |
| 第六章 HBx蛋白和Hepsin蛋白相互作用的细胞功能研究 | 第102-117页 |
| ·材料与方法 | 第103-108页 |
| ·材料 | 第103页 |
| ·细胞 | 第103页 |
| ·临床组织样品总RNA的提取 | 第103-104页 |
| ·Hepsin蛋白基因扩增 | 第104页 |
| ·Hepsin蛋白基因克隆及其鉴定 | 第104页 |
| ·Hepsin蛋白基因序列测定 | 第104-105页 |
| ·细胞增殖活性测定 | 第105-106页 |
| ·细胞凋亡诱导和细胞凋亡率的测定 | 第106页 |
| ·DAPI染色分析 | 第106-107页 |
| ·Hepsin蛋白与HBx蛋白相互作用对HBV蛋白表达及病毒复制影响 | 第107-108页 |
| ·结果 | 第108-115页 |
| ·Hepsin基因的扩增及其克隆 | 第108-109页 |
| ·Hepsin基因核苷酸序列测定及其序列分析 | 第109-110页 |
| ·Hepsin基因在临床样品中表达水平研究 | 第110页 |
| ·Hepsin蛋白与HBx蛋白相互作用对细胞增殖能力的影响 | 第110-111页 |
| ·Hepsin蛋白与HBx蛋白相互作用对细胞凋亡的影响 | 第111-114页 |
| ·Hepsin蛋白与HBx蛋白相互作用对HBV蛋白表达及病毒复制影响 | 第114-115页 |
| ·讨论 | 第115-117页 |
| 研究总结 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-149页 |
| 附录Ⅰ 论文涉及引物一览表 | 第149-150页 |
| 附录Ⅱ 论文涉及的试剂及其配制 | 第150-159页 |
| 附录Ⅲ 在读期间发表文章 | 第159-160页 |
| 致谢 | 第160页 |
