| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一部分 前言 | 第9-20页 |
| 1 肺结核 | 第9页 |
| 2 结核病流行现状概述 | 第9-10页 |
| 3 结核病实验室诊断方法 | 第10-11页 |
| ·结核菌素皮肤试验 | 第10页 |
| ·抗酸染色涂片镜检法 | 第10页 |
| ·结核分枝杆菌培养诊断技术 | 第10页 |
| ·PCR检测技术 | 第10-11页 |
| ·免疫学方法 | 第11页 |
| 4 结核分枝杆菌保护性抗原研究进展 | 第11-15页 |
| ·结核分枝杆菌保护性免疫机制 | 第11-12页 |
| ·结核分枝杆菌主要的保护性抗原 | 第12-15页 |
| 5 预防结核病研究进展 | 第15-18页 |
| ·结核病感染与机体可能免疫机制研究 | 第16页 |
| ·结核病疫苗 | 第16-17页 |
| ·结核病疫苗现状及展望 | 第17-18页 |
| 6 本研究的意义和前景 | 第18-19页 |
| 7 实验设计方案 | 第19-20页 |
| 第二部分 结核分枝杆菌MPT63抗原蛋白的表达及纯化 | 第20-37页 |
| 1 材料与方法 | 第20-22页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-31页 |
| ·结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA的提取 | 第22页 |
| ·MPT63基因的获取 | 第22-23页 |
| ·结核菌MPT63编码基因的克隆 | 第23页 |
| ·克隆载体的构建及鉴定 | 第23-25页 |
| ·表达载体的构建及鉴定 | 第25-26页 |
| ·基因工程菌pET30a-MPT63/BL21(DE3)的构建与筛选 | 第26-27页 |
| ·抗原蛋白MPT63编码基因的诱导表达 | 第27-29页 |
| ·亲和层析分离纯化重组MPT63肽段 | 第29-30页 |
| ·Wester Blotting鉴定重组mpt63的特异性 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-37页 |
| ·MPT63编码基因引物设计及目的片段的扩增 | 第31页 |
| ·抗原蛋白MPT63编码基因PCR结果 | 第31页 |
| ·克隆载体的构建及酶切鉴定结果 | 第31页 |
| ·MPT63编码基因及氨基酸序列 | 第31-32页 |
| ·表达载体的构建 | 第32页 |
| ·MPT63蛋白编码基因的诱导表达结果 | 第32-33页 |
| ·MPT63蛋白最佳诱导时间分析结果 | 第33页 |
| ·MPT63蛋白最佳诱导剂浓度分析 | 第33-34页 |
| ·MPT63温度诱导分析 | 第34-35页 |
| ·MPT63的可溶性分析 | 第35页 |
| ·重组蛋白MPT63的分离纯化 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白MPT63的western blot鉴定 | 第36-37页 |
| 第三部分 重组结核分枝杆菌融合蛋白MPT63检测抗体 | 第37-40页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·血清标本 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·缓冲液配制 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-38页 |
| ·采用方阵滴定法确定抗原最适包被浓度和酶标二抗最适工作浓度 | 第37-38页 |
| ·ELISA检测临床标本评价抗原的血清学诊断价值并做分析 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-40页 |
| ·包被抗原工作浓度的选择 | 第38页 |
| ·临床标本ELISA检测 | 第38-40页 |
| 第四部分 讨论 | 第40-43页 |
| 1 原核表达 | 第40-41页 |
| 2 结核分枝杆菌MPT63引物设计与克隆载体构建 | 第41页 |
| 3 结核分枝杆菌MPT63蛋白的诱导与表达 | 第41-43页 |
| 第五部分 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
