| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-16页 |
| ·海水养殖及其主要病害 | 第10-12页 |
| ·海洋鱼类细菌性病原体迟钝爱德华氏菌 | 第10页 |
| ·海洋鱼类细菌性病原体鲶鱼爱德华氏菌 | 第10页 |
| ·海洋鱼类细菌性病原体嗜水气单胞菌 | 第10-11页 |
| ·海洋鱼类细菌性病原体鳗弧菌 | 第11页 |
| ·海洋鱼类细菌性病原体溶藻弧菌 | 第11页 |
| ·海洋鱼类细菌性病原体哈维氏弧菌 | 第11页 |
| ·水产养殖病害的控制 | 第11-12页 |
| ·鱼类疫苗研究近况 | 第12-13页 |
| ·三磷酸甘油醛脱氢酶 | 第13-14页 |
| ·GAPDH在胞内糖酵解过程中的作用 | 第13页 |
| ·GAPDH的非胞内定位 | 第13-14页 |
| ·GAPDH在微生物中的多功能性 | 第14页 |
| ·GAPDH在高等生物中的多功能性 | 第14页 |
| ·GAPDH的免疫保护作用 | 第14页 |
| ·本课题的研究内容及意义 | 第14-16页 |
| 第2章 细菌性病原微生物GAPDH编码基因的克隆、表达与蛋白纯化 | 第16-29页 |
| ·引言 | 第16页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·药品、试剂与仪器设备 | 第16页 |
| ·菌株和质粒 | 第16页 |
| ·细菌培养基 | 第16-17页 |
| ·缓冲液 | 第17页 |
| ·PCR引物 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-24页 |
| ·细菌培养及菌种保藏 | 第17页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第17-19页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第19-20页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第20页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第20页 |
| ·PCR方法 | 第20-21页 |
| ·菌落PCR | 第21页 |
| ·DNA胶回收 | 第21-22页 |
| ·生物学软件 | 第22页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第22-23页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第23-24页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第24页 |
| ·结果与讨论 | 第24-28页 |
| ·海洋鱼类病原微生物GAPDH蛋白序列比对和分析 | 第24-25页 |
| ·海洋鱼类病原微生物gapA基因的克隆 | 第25-27页 |
| ·海洋鱼类病原微生物GAPDH蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第27页 |
| ·重组GAPDH蛋白的分离纯化 | 第27-28页 |
| ·本章小结 | 第28-29页 |
| 第3章 海洋鱼类病原微生物GAPDH蛋白的定位研究 | 第29-37页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·材料与方法 | 第29-33页 |
| ·菌株、试剂 | 第29页 |
| ·缓冲液 | 第29页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第29-30页 |
| ·间接ELISA法检测抗体滴度 | 第30页 |
| ·六种病原微生物细胞不同组分的分离 | 第30-31页 |
| ·Western bloting检测GAPDH蛋白在细胞不同组分中的分布情况 | 第31-32页 |
| ·间接免疫荧光观察 | 第32页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-35页 |
| ·迟钝爱德华氏菌EIB202 GAPDH蛋白多克隆抗体制备 | 第33页 |
| ·Western bloting检测GAPDH在细胞各组分中的定位 | 第33-34页 |
| ·间接免疫荧光分析 | 第34页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-37页 |
| 第4章 海洋鱼类病原菌GAPDH蛋白的免疫保护作用 | 第37-43页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·材料与方法 | 第37-38页 |
| ·菌株、试剂、缓冲液、培养基 | 第37页 |
| ·佐剂 | 第37页 |
| ·实验动物 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-41页 |
| ·蛋白免疫剂量的确定 | 第38-39页 |
| ·免疫策略的确定 | 第39-40页 |
| ·海洋鱼类病原菌GAPDH蛋白的交叉免疫保护分析 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-43页 |
| 第5章 迟钝爱德华氏菌EIB202中GAPDH蛋白功能初步研究 | 第43-48页 |
| ·引言 | 第43页 |
| ·材料与方法 | 第43页 |
| ·菌株、试剂、缓冲液、培养基 | 第43页 |
| ·PCR引物 | 第43页 |
| ·质粒 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·迟钝爱德华氏菌EIB202电转化感受态细胞制备 | 第43-44页 |
| ·迟钝爱德华氏菌EIB202的电转化 | 第44页 |
| ·相关分子生物学实验方法 | 第44页 |
| ·EPC细胞培养 | 第44页 |
| ·侵染及内化的测定 | 第44-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-46页 |
| ·迟钝爱德华氏菌EIB202 GAPDH过表达菌株的构建 | 第45页 |
| ·基因gapA过量表达情况分析 | 第45页 |
| ·野生株和过表达株对EPC细胞的侵染能力比较 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-48页 |
| 第6章 总结与展望 | 第48-50页 |
| ·全文总结 | 第48页 |
| ·展望 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
