| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第4-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-24页 |
| ·DHA的主要生理功能 | 第10-12页 |
| ·多不饱和脂肪酸分类 | 第10页 |
| ·DHA对大脑发育和视力的影响 | 第10-11页 |
| ·DHA对心血管疾病的预防和治疗 | 第11页 |
| ·DHA的抗癌作用 | 第11页 |
| ·DHA的抗炎与免疫作用 | 第11-12页 |
| ·DHA对基因表达的影响 | 第12页 |
| ·DHA的生物来源 | 第12-14页 |
| ·深海鱼油 | 第12页 |
| ·水生微藻 | 第12-13页 |
| ·细菌 | 第13页 |
| ·海洋真菌 | 第13-14页 |
| ·DHA的生物合成途径 | 第14-17页 |
| ·碳链延长酶与脱饱和酶参与的合成途径 | 第14-15页 |
| ·Polyketide synthase(PKS)生物合成途径 | 第15-16页 |
| ·基因工程方法 | 第16-17页 |
| ·全长基因的克隆方法 | 第17-22页 |
| ·cDNA文库筛选法 | 第17-18页 |
| ·cDNA末端快速扩增(RACE)法 | 第18-20页 |
| ·RACE技术的原理 | 第18页 |
| ·RACE技术的优化与改良 | 第18-20页 |
| ·生物信息学 | 第20-22页 |
| ·从基因组序列预测新基因 | 第20-21页 |
| ·通过多序列比对从基因组DNA序列中预测新基因 | 第21页 |
| ·电子克隆(in silico cloning) | 第21-22页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| ·目的 | 第22页 |
| ·意义 | 第22-24页 |
| 第2章 裂殖壶菌酰基载体蛋白基因的序列分析与克隆 | 第24-36页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·菌种及质粒 | 第24页 |
| ·酶及相关试剂 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·cDNA文库中ACP基因片段的获得 | 第25页 |
| ·SDS碱裂解法抽提质粒 | 第25-26页 |
| ·目的基因获得 | 第26页 |
| ·TA克隆 | 第26-27页 |
| ·蛋白质结构研究 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-33页 |
| ·目的基因的获得 | 第28-29页 |
| ·TA克隆 | 第29页 |
| ·测序结果 | 第29页 |
| ·蛋白质结构研究 | 第29-32页 |
| ·进化树分析 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-36页 |
| 第3章 裂殖壶菌酰基载体蛋白基因的表达 | 第36-48页 |
| ·前言 | 第36页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·载体和菌株 | 第36页 |
| ·工具酶 | 第36页 |
| ·全长基因扩增引物 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36-38页 |
| ·基因表达实验所用的溶液 | 第36-37页 |
| ·蛋白电泳所用的溶液和试剂 | 第37页 |
| ·破碎细胞所用的溶液和试剂 | 第37页 |
| ·纯化和洗涤包涵体所用的溶液 | 第37页 |
| ·溶解包涵体所用的溶液 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·重组质粒(pET-30a-ACP)的测序 | 第40页 |
| ·重组质粒(pET-30a-ACP)的转化和IPTG诱导表达 | 第40页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第40页 |
| ·包涵体的破碎与检测 | 第40-41页 |
| ·结果 | 第41-45页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·重组质粒(pET-30a-ACP)的测序 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第44-45页 |
| ·破碎后的包涵体检测 | 第45页 |
| ·小结 | 第45-48页 |
| 第4章 裂殖壶菌丙二酸单酰转移酶基因组DNA与cDNA序列分析 | 第48-73页 |
| ·前言 | 第48页 |
| ·材料与方法 | 第48-58页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·菌种 | 第48页 |
| ·载体及工具酶 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-58页 |
| ·衔接头PCR原理 | 第50页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·部分基因组DNA的获得 | 第51页 |
| ·MAT基因5′端上游区域的克隆 | 第51-54页 |
| ·MAT基因3′端上游区域的克隆 | 第54-56页 |
| ·cDNA(MAT-cDNA)的获得 | 第56-57页 |
| ·cDNA克隆与序列测定 | 第57-58页 |
| ·序列分析 | 第58页 |
| ·结果 | 第58-72页 |
| ·部分基因组DNA的获得 | 第58-60页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第58-59页 |
| ·PCR结果 | 第59页 |
| ·TA克隆 | 第59-60页 |
| ·基因组DNA的获得 | 第60-66页 |
| ·基因组5′端的获得 | 第60-62页 |
| ·基因组3′端的获得 | 第62-64页 |
| ·DNA序列分析 | 第64-66页 |
| ·cDNA序列克隆和分析 | 第66-67页 |
| ·菌丝体总RNA的提取 | 第66页 |
| ·RT-PCR | 第66-67页 |
| ·阳性克隆子PCR验证 | 第67页 |
| ·基因组DNA与cDNA序列比对 | 第67-68页 |
| ·cDNA序列分析 | 第68-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 附录 主要符号对照表 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 个人简历 | 第88-90页 |
