| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-21页 |
| ·禽流感的概况 | 第9-11页 |
| ·禽流感的病原及分子生物学 | 第9页 |
| ·禽流感病毒基因组结构 | 第9-10页 |
| ·HA和NA基因功能 | 第10-11页 |
| ·禽流感的疫苗研究进展 | 第11-12页 |
| ·灭活全病毒疫苗 | 第11页 |
| ·亚单位疫苗 | 第11页 |
| ·DNA疫苗 | 第11-12页 |
| ·重组活载体疫苗 | 第12页 |
| ·反向遗传操作疫苗 | 第12页 |
| ·水禽流感研究进展 | 第12-14页 |
| ·水禽流感的流行病学 | 第12-13页 |
| ·水禽流感的公共卫生意义 | 第13-14页 |
| ·鸭瘟病毒载体研究进展 | 第14-18页 |
| ·鸭瘟病毒概述 | 第14-15页 |
| ·鸭瘟病毒基因组特征 | 第15-16页 |
| ·鸭瘟疫苗研究进展 | 第16-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-21页 |
| 2 材料 | 第21-24页 |
| ·毒株和细胞 | 第21页 |
| ·质粒和菌株 | 第21-22页 |
| ·工具酶 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·DNA克隆所需的主要试剂 | 第22-23页 |
| ·转染所需的试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| 3 方法 | 第24-33页 |
| ·鸭瘟病毒基因组的提取 | 第24页 |
| ·鸡胚成纤维细胞的制作及传代 | 第24页 |
| ·鸭瘟病毒DPV34F2株的扩大培养 | 第24页 |
| ·鸭瘟病毒DNA的提取 | 第24页 |
| ·鸭瘟病毒TK基因、报告基因(EGFP)、禽流感病毒HA和NA基因的PCR及测序 | 第24-27页 |
| ·TK基因、EGFP基因、HA和NA基因的引物设计 | 第24-25页 |
| ·TK基因、EGFP基因、HA和NA基因的PCR | 第25页 |
| ·回收扩增的基因片段TK、EGFP、HA、NA | 第25页 |
| ·基因片段TK、EGFP、HA、NA分别连接pGEM-T easy载体 | 第25-26页 |
| ·转化 | 第26页 |
| ·质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·酶切鉴定阳性克隆 | 第27页 |
| ·测序 | 第27页 |
| ·鸭瘟病毒转移载体质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·载体和目的片段的酶切处理 | 第27页 |
| ·鸭瘟病毒转移载体的连接、转化、质粒提取 | 第27-28页 |
| ·鸭瘟病毒转移载体的酶切鉴定 | 第28页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒转移载体的构建 | 第28-30页 |
| ·载体和目的片段的酶切处理 | 第28页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒转移载体的连接、转化、质粒提取 | 第28-29页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒转移载体的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒转移载体构建流程图见图3 | 第30-31页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒的获得 | 第31-33页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法)与纯化 | 第31页 |
| ·转染细胞的准备 | 第31页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒的转染和筛选 | 第31-32页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 4 试验结果 | 第33-40页 |
| ·鸭瘟病毒引起的细胞病变 | 第33页 |
| ·鸭瘟病毒TK基因、报告基因(EGFP)、禽流感病毒HA和NA基因的PCR及测序 | 第33-37页 |
| ·TK基因、EGFP基因、HA和NA基因的PCR | 第33-34页 |
| ·重组质粒pGEM-TK、pGEM-EGFP、pGEM-HA、pGEM-NA的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因的测序 | 第35-37页 |
| ·鸭瘟病毒转移载体的构建 | 第37-38页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒转移载体的构建 | 第38-39页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒的获得 | 第39-40页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒的转染 | 第39页 |
| ·禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 5 讨论 | 第40-45页 |
| ·选用鸭瘟病毒作为重组病毒载体 | 第40页 |
| ·鸭瘟病毒载体的特点 | 第40页 |
| ·同源臂的选择及克隆 | 第40页 |
| ·外源基因禽流感病毒HA和NA基因的选择和克隆 | 第40-41页 |
| ·关于禽流感病毒HA和NA基因重组鸭瘟病毒的构建 | 第41页 |
| ·关于转染的探讨 | 第41-42页 |
| ·报告基因和目的基因的表达 | 第42页 |
| ·鸭瘟病毒的同源重组 | 第42-43页 |
| ·本研究的创新点 | 第43-44页 |
| ·本试验的应用前景 | 第44-45页 |
| 6 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录 | 第51-54页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录 | 第57-63页 |
