| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| 略语中英文对照 | 第18-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-71页 |
| 第一章 体细胞核移植的研究进展 | 第19-29页 |
| 1 体细胞核移植技术的发展历程 | 第19-21页 |
| ·胚胎细胞核移植 | 第19-20页 |
| ·体细胞核移植 | 第20-21页 |
| 2 体细胞核移植技术方法的研究进展 | 第21-24页 |
| ·显微操作的核移植方法 | 第21-22页 |
| ·Dolly法 | 第21页 |
| ·火奴鲁鲁法 | 第21页 |
| ·损伤修复法 | 第21-22页 |
| ·连续核移植法 | 第22页 |
| ·化学去核—显微操作法 | 第22页 |
| ·手工操作(handmade)的体细胞核移植方法 | 第22-23页 |
| ·正向体细胞核移植(先去核再融合) | 第22-23页 |
| ·反向体细胞核移植(先融合后去核) | 第23页 |
| ·手工操作与显微操作相结合的体细胞核移植方法 | 第23-24页 |
| 3 体细胞核移植机理的研究 | 第24-29页 |
| ·细胞周期 | 第24-26页 |
| ·受体胞质中MPF的调控 | 第24页 |
| ·供体细胞的周期 | 第24-26页 |
| ·卵胞质对供体核的重编程 | 第26页 |
| ·基因组表观遗传修饰的变化 | 第26-28页 |
| ·重构胚核重编程中甲基化变化 | 第26-27页 |
| ·重构胚的基因印迹与X染色体失活 | 第27-28页 |
| ·端粒 | 第28-29页 |
| 第二章 异种体细胞核移植的研究进展 | 第29-53页 |
| 1 异种核移植技术的研究历史与现状 | 第29-31页 |
| ·以早期胚胎细胞为供核细胞的异种核移植 | 第29-30页 |
| ·以体细胞为供核细胞的异种核移植 | 第30-31页 |
| 2 影响异种核移植效率的因素 | 第31-46页 |
| ·供体细胞的准备 | 第32-34页 |
| ·供体动物的年龄 | 第32页 |
| ·供体动物的性别 | 第32页 |
| ·供体细胞的培养代数 | 第32-33页 |
| ·供体细胞的种类 | 第33页 |
| ·供体细胞的冷冻与冷藏对核移植效果的影响 | 第33-34页 |
| ·供体细胞的处理方法 | 第34页 |
| ·受体卵母细胞的准备 | 第34-41页 |
| ·卵母细胞的来源 | 第34-35页 |
| ·受体卵母细胞的选择 | 第35-36页 |
| ·卵母细胞的体外成熟 | 第36-39页 |
| ·卵母细胞的去核 | 第39-41页 |
| ·细胞核的移植 | 第41页 |
| ·重构胚的融合 | 第41-42页 |
| ·化学融合 | 第42页 |
| ·病毒融合 | 第42页 |
| ·电融合 | 第42页 |
| ·重构胚的激活 | 第42-44页 |
| ·化学激活 | 第43-44页 |
| ·电激活 | 第44页 |
| ·精子提取物激活 | 第44页 |
| ·重构胚的培养 | 第44-46页 |
| 3 异种体细胞核移植中的线粒体遗传规律 | 第46-47页 |
| 4 异种核移植存在的问题和可能的解决方法 | 第47-49页 |
| ·存在的问题 | 第47-48页 |
| ·可能的解决方法 | 第48-49页 |
| 5 异种核移植的应用前景 | 第49-53页 |
| ·在医学领域中的应用 | 第49-50页 |
| ·在畜牧业生产上的应用 | 第50页 |
| ·拯救濒危动物 | 第50页 |
| ·促进基础生物科学的发展 | 第50-51页 |
| ·生产转基因动物 | 第51-53页 |
| 第三章 盘羊—绵羊异种核移植的理论基础及研究意义 | 第53-59页 |
| 1 盘羊现状 | 第53-57页 |
| ·盘羊简介 | 第53-55页 |
| ·盘羊在中国的生存现状 | 第55-57页 |
| 2 盘羊—绵羊异种核移植研究的意义 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-71页 |
| 第二部分 试验研究 | 第71-141页 |
| 第四章 供体细胞系的建立 | 第71-87页 |
| 1 材料与方法 | 第71-75页 |
| ·试验材料 | 第72-73页 |
| ·试验动物 | 第72页 |
| ·主要仪器用品 | 第72页 |
| ·主要试剂 | 第72页 |
| ·主要溶液的配制 | 第72-73页 |
| ·试验方法 | 第73-75页 |
| ·细胞的原代培养 | 第73页 |
| ·培养细胞的传代 | 第73-74页 |
| ·细胞生长曲线绘制 | 第74页 |
| ·培养细胞的冷冻保存及复苏 | 第74-75页 |
| ·染色体核型分析 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-83页 |
| ·培养细胞的一般形态观察 | 第75-76页 |
| ·培养细胞的体外生长规律 | 第76-77页 |
| ·冷冻方法和冷冻液对解冻后细胞存活率的影响 | 第77-79页 |
| ·盘羊和绵羊染色体的核型分析 | 第79-83页 |
| ·盘羊和绵羊的染色体数目 | 第79-80页 |
| ·盘羊和绵羊的染色体形态及核型分析 | 第80-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| ·供体细胞的体外培养及冷冻保存 | 第83-84页 |
| ·供体细胞的染色体分析 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 第五章 盘羊异种重构胚的构建 | 第87-113页 |
| 1 材料与方法 | 第88-92页 |
| ·试验材料 | 第88-90页 |
| ·主要仪器用品 | 第88页 |
| ·主要试剂 | 第88-89页 |
| ·主要溶液的配制 | 第89-90页 |
| ·试验方法 | 第90-92页 |
| ·绵羊卵巢的采集 | 第90页 |
| ·卵巢卵母细胞的收集 | 第90页 |
| ·卵母细胞的体外成熟培养 | 第90页 |
| ·成熟检查 | 第90页 |
| ·成熟卵母细胞的去核 | 第90-91页 |
| ·移核 | 第91页 |
| ·融合 | 第91页 |
| ·成熟卵母细胞或重构胚的激活处理 | 第91-92页 |
| ·胚胎的体外培养 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-104页 |
| ·保存15-17 h的卵巢卵母细胞发育能力的研究 | 第92-94页 |
| ·卵巢保存温度对卵母细胞发育能力的影响 | 第92-94页 |
| ·卵巢保存液对卵母细胞发育能力的影响 | 第94页 |
| ·盲吸去核法和化学辅助去核法对核移植胚效率的影响 | 第94-99页 |
| ·秋水仙素处理时间对化学辅助法去核率的影响 | 第94-95页 |
| ·秋水仙素处理浓度对化学辅助法去核率的影响 | 第95-96页 |
| ·盲吸去核法与化学辅助去核法的去核率比较 | 第96-97页 |
| ·盲吸去核法与化学辅助去核法对重构胚发育的影响 | 第97-99页 |
| ·电融合方式对核移植效率的影响 | 第99-100页 |
| ·不同的融合方案对重构胚发育的影响 | 第99页 |
| ·不同的融合次数对重构胚发育的影响 | 第99-100页 |
| ·激活方式对孤雌胚和核移植胚发育的影响 | 第100-102页 |
| ·成熟培养时间对孤雌胚体外发育的影响 | 第100-101页 |
| ·6—DMAP的作用时间对孤雌胚体外发育的影响 | 第101页 |
| ·激活方法对盘羊—绵羊异种重构胚发育的影响 | 第101-102页 |
| ·培养液的改进对孤雌胚和核移植胚发育的影响 | 第102-104页 |
| ·改进的培养液对孤雌胚体外发育的影响 | 第102页 |
| ·EGF对核移植胚发育的影响 | 第102-104页 |
| 3 讨论 | 第104-109页 |
| ·绵羊卵巢的保存 | 第104-105页 |
| ·卵母细胞的去核 | 第105-106页 |
| ·重构胚的电融合 | 第106页 |
| ·卵母细胞与重构胚的激活 | 第106-107页 |
| ·胚胎的体外培养 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-113页 |
| 第六章 盘羊供体细胞对异种核移植效率的影响 | 第113-127页 |
| 1 材料与方法 | 第113-115页 |
| ·试验材料 | 第113-114页 |
| ·主要仪器用品 | 第113页 |
| ·主要试剂 | 第113-114页 |
| ·主要溶液的配制 | 第114页 |
| ·试验方法 | 第114-115页 |
| ·培养细胞的饥饿处理 | 第114页 |
| ·细胞周期测定 | 第114页 |
| ·盘羊—绵羊异种重构胚的构建 | 第114-115页 |
| ·试验设计 | 第115页 |
| ·统计分析 | 第115页 |
| 2 结果与分析 | 第115-121页 |
| ·供体动物的个体对重构胚发育的影响 | 第115-116页 |
| ·供体细胞的代次对重构胚发育的影响 | 第116页 |
| ·供体细胞的汇合度对重构胚发育的影响 | 第116-118页 |
| ·不同血清饥饿时间对重构胚发育的影响 | 第118-120页 |
| ·供体细胞的保存方式对重构胚发育的影响 | 第120页 |
| ·供体细胞的状态对重构胚发育的影响 | 第120-121页 |
| 3 讨论 | 第121-124页 |
| 参考文献 | 第124-127页 |
| 第七章 不同生产方式胚胎的体外发育率比较及重构胚的移植试验 | 第127-141页 |
| 1 材料与方法 | 第128-132页 |
| ·试验材料 | 第128-129页 |
| ·主要仪器用品 | 第128页 |
| ·主要试剂 | 第128页 |
| ·主要溶液 | 第128-129页 |
| ·试验方法 | 第129-131页 |
| ·绵羊卵母细胞体外成熟 | 第129页 |
| ·卵母细胞孤雌激活 | 第129-130页 |
| ·体外受精 | 第130页 |
| ·体细胞核移植 | 第130页 |
| ·囊胚的细胞计数 | 第130页 |
| ·胚胎移植 | 第130-131页 |
| ·试验设计 | 第131-132页 |
| ·数据统计与分析 | 第132页 |
| 2 结果与分析 | 第132-136页 |
| ·不同生产方式胚胎的体外发育率比较 | 第132-134页 |
| ·不同季节的绵羊卵巢对PAEs和FC-NTEs体外发育能力的影响 | 第134页 |
| ·低温长时间保存的绵羊卵巢对PAEs和FC-NTEs体外发育能力的影响 | 第134-135页 |
| ·SOFaa和CR1aa培养基对PAEs和FC-NTEs体外发育能力的影响 | 第135页 |
| ·盘羊—绵羊异种重构胚的移植结果 | 第135-136页 |
| 3 讨论 | 第136-139页 |
| 参考文献 | 第139-141页 |
| 全文结论 | 第141-143页 |
| 创新之处 | 第143-145页 |
| 攻读学位期间发表及待发表的学术论文 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147页 |
