| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-29页 |
| ·EIAV认知历史和现状 | 第13-15页 |
| ·EIAV形态结构和理化特性 | 第15页 |
| ·EIAV的生物学特性 | 第15-17页 |
| ·EIAV的血凝性 | 第15页 |
| ·EIAV的细胞嗜性 | 第15-16页 |
| ·EIAV的致病性 | 第16-17页 |
| ·EIAV的分子生物学 | 第17-23页 |
| ·EIAV基因组结构 | 第17页 |
| ·EIAV的基因及其编码蛋白 | 第17-23页 |
| ·EIAV基因非编码区LTR相关研究进展 | 第23-28页 |
| ·EIAV LTR的结构和生物学功能 | 第23-24页 |
| ·LTR增强子区与细胞嗜性密切相关 | 第24页 |
| ·与病毒致病性相关的LTR转录因子基序 | 第24-25页 |
| ·LTR转录因子基序及其变异对病毒复制的影响 | 第25页 |
| ·体外细胞培养过程中LTR的变异 | 第25-26页 |
| ·在中国EIAV弱毒疫苗致弱过程中LTR的变化 | 第26-28页 |
| ·本试验的目的和意义 | 第28-29页 |
| 第二章 马传染性贫血病毒驴胎皮肤细胞株不同代次毒LTR的序列分析及启动子活性比较 | 第29-45页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·病毒 | 第29页 |
| ·质粒 | 第29-30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-32页 |
| ·驴胎皮肤细胞的制备与培养 | 第30页 |
| ·EIAV_(FDD)病毒培养及前病毒DNA提取 | 第30-31页 |
| ·EIAV_(FDD)前病毒DNA LTR PCR扩增与克隆 | 第31页 |
| ·pCAT-LTR质粒构建 | 第31页 |
| ·转染用质粒纯化 | 第31-32页 |
| ·转染 | 第32页 |
| ·CAT含量测定 | 第32页 |
| ·β-galactosidase活性测定 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-42页 |
| ·驴胎皮肤细胞毒株前病毒LTR的扩增及克隆测序 | 第33页 |
| ·pCAT-LTR质粒的酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·EIAV_(FDD)前病毒LTR序列分析 | 第34-40页 |
| ·前病毒LTR负调节区基因变异 | 第34页 |
| ·前病毒LTR增强子区基因变异 | 第34-40页 |
| ·前病毒LTR转录起始位点变异 | 第40页 |
| ·病毒传代过程中准种的LTR进化分析 | 第40-42页 |
| ·EIAV_(DLA)、EIAV_(FDD) LTR的启动子活性比较 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 马传染性贫血病毒不同代次毒株LTR启动子活性比较 | 第45-59页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·质粒 | 第45-46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-49页 |
| ·马巨噬细胞培养 | 第46页 |
| ·驴胎皮肤细胞的制备与培养 | 第46-47页 |
| ·驴白细胞培养及病毒繁殖 | 第47页 |
| ·EIAV_(DLA)前病毒LTR PCR扩增与克隆 | 第47页 |
| ·pGL-LTR质粒构建 | 第47页 |
| ·pGL-DL25突变质粒构建 | 第47-48页 |
| ·转染用LTR质粒的选择 | 第48-49页 |
| ·转染驴胎皮肤细胞比较不同代次毒LTR启动子活性 | 第49页 |
| ·转染马巨噬细胞比较不同代次毒LTR启动子活性 | 第49页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-55页 |
| ·EIAV_(DLA) LTR测序及比较分析 | 第49-52页 |
| ·EIAV强毒株、驴白细胞毒株LTR负调节区序列变异 | 第52-53页 |
| ·驴白细胞弱毒疫苗株LTR多样性分析 | 第53页 |
| ·不同代次毒株LTR启动子活性比较 | 第53-55页 |
| ·驴白细胞弱毒疫苗株不同类型LTR启动子活性比较 | 第53-55页 |
| ·EIAV_D,EIAV_(DL),EIAV_(DLA)和EIAV_(FDD) LTR启动子活性比较 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-59页 |
| 第四章 高代次EIAV_(FDD)弱毒株的全基因序列分析及生物学特性研究 | 第59-75页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·病毒 | 第59页 |
| ·试剂 | 第59页 |
| ·仪器 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-63页 |
| ·驴胎皮肤细胞(FDD)的制备与培养 | 第59页 |
| ·EIAV_(FDD)前病毒DNA提取 | 第59-60页 |
| ·第19、26代驴胎皮肤细胞毒(EIAV_(FDD))全基因序列扩增 | 第60-61页 |
| ·PCR产物的克隆与测序 | 第61页 |
| ·试验马分组及病料采集 | 第61页 |
| ·试验马血清p26抗体检测 | 第61页 |
| ·试验马外周血白细胞制备 | 第61页 |
| ·Real-time RT-PCR标准曲线建立 | 第61-63页 |
| ·PCR扩增EIAV gag基因片段及克隆 | 第61页 |
| ·体外转录 | 第61-62页 |
| ·转录产物纯化 | 第62页 |
| ·RNA标准品制备 | 第62页 |
| ·Real-time RT-PCR标准曲线建立 | 第62-63页 |
| ·结果 | 第63-72页 |
| ·全基因PCR扩增结果 | 第63-64页 |
| ·第19、26代EIAV_(FDD) LTR序列比较分析 | 第64-65页 |
| ·第19、26代EIAV_(FDD) gag基因序列比较分析 | 第65页 |
| ·第19、26代EIAV_(FDD) pol基因序列比较分析 | 第65-66页 |
| ·第19、26代EIAV_(FDD) env基因序列比较分析 | 第66-68页 |
| ·第19、26代EIAV_(FDD) S1蛋白序列比较分析 | 第68页 |
| ·第19、26代EIAV_(FDD) S2蛋白序列比较分析 | 第68-69页 |
| ·第19、26代EIAV_(FDD) S3蛋白序列比较分析 | 第69-70页 |
| ·攻毒后各试验马抗p26抗体的变化 | 第70页 |
| ·Real-time RT-PCR标准曲线建立 | 第70-71页 |
| ·试验马血浆病毒RNA载量检测 | 第71-72页 |
| ·试验马外周血白细胞LTR序列分析 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| 第五章 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 附录 | 第84-100页 |
| 附录1 马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒第19代EIAV_(FDD)前病毒全基因序列 | 第84-86页 |
| 附录2 马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒第26代EIAV_(FDD)前病毒全基因序列 | 第86-88页 |
| 附录3 第19、26代EIAV_(FDD)与中国EIAV强毒株EIAV_L、EIAV_D和弱毒疫苗株EIAV_(DLV)、EIAV_(FDD)全基因序列比较结果 | 第88-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简历 | 第101页 |
