| 摘要 | 第1-5页 |
| Summary | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第6-10页 |
| Ⅰ 引言 | 第10-11页 |
| Ⅱ 文献综述 | 第11-30页 |
| 1 马铃薯生产现状 | 第11-13页 |
| ·世界马铃薯生产现状 | 第11页 |
| ·中国马铃薯生产现状 | 第11-12页 |
| ·马铃薯加工业发展状况 | 第12-13页 |
| 2 国内外马铃薯育种现状 | 第13-14页 |
| ·国外马铃薯育种现状 | 第13-14页 |
| ·国内马铃薯育种现状 | 第14页 |
| 3 基因工程技术在马铃薯育种中的应用 | 第14-17页 |
| ·马铃薯抗病毒病基因工程 | 第15页 |
| ·马铃薯抗细菌和真菌性病害的基因工程 | 第15页 |
| ·马铃薯抗虫基因工程 | 第15-16页 |
| ·马铃薯抗除草剂基因工程 | 第16页 |
| ·马铃薯品质改良基因工程 | 第16-17页 |
| 4 马铃薯淀粉品质改良基因工程 | 第17-21页 |
| ·淀粉合成机制 | 第17-19页 |
| ·淀粉合成酶（SS） | 第19-21页 |
| 5 糊化温度低、冻融稳定性好的淀粉的应用 | 第21-22页 |
| ·支链淀粉和直链淀粉的特性 | 第21页 |
| ·淀粉组分与淀粉糊化特性及冻融稳定性的关系 | 第21-22页 |
| 6 反义RNA 技术 | 第22-23页 |
| ·反义RNA 的发现 | 第22-23页 |
| ·反义RNA 作用的原理 | 第23页 |
| 7 植物基因工程中启动子研究 | 第23-26页 |
| ·组成型启动子 | 第24-25页 |
| ·组织特异性启动子 | 第25-26页 |
| ·诱导型启动子 | 第26页 |
| 8 植物遗传转化技术在马铃薯基因工程中的应用 | 第26-27页 |
| ·基因枪技术在植物遗传转化中的应用 | 第26页 |
| ·农杆菌介导法进行植物遗传转化技术的研究 | 第26-27页 |
| ·农杆菌介导遗传转化技术在马铃薯基因工程中的应用 | 第27页 |
| 9 本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 10 研究技术路线 | 第29-30页 |
| Ⅲ 试验材料与方法 | 第30-48页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·菌种和质粒 | 第30页 |
| ·工具酶和试剂 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-35页 |
| ·质粒DNA 的制备 | 第31-32页 |
| ·根癌农杆菌质粒的制备 | 第32-34页 |
| ·马铃薯块茎RNA 的提取方法 | 第34页 |
| ·First-Strand cDNA 合成 | 第34-35页 |
| 3 基因克隆 | 第35-44页 |
| ·马铃薯可溶性淀粉合成酶SSSⅢ的克隆 | 第35-37页 |
| ·马铃薯可溶性淀粉合成酶SSSⅡ的克隆 | 第37-38页 |
| ·马铃薯GBSS 基因5’侧翼序列序列鉴定 | 第38-39页 |
| ·马铃薯块茎特异性启动子Patatin 序列的亚克隆 | 第39-40页 |
| ·马铃薯GBSS 基因cDNA 序列的鉴定 | 第40-41页 |
| ·反义融合基因GS_2S_3 的构建 | 第41-44页 |
| 4 植物表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·GBSS 基因5’侧翼序列和Patatin 启动子驱动的GUS 基因植物表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·GBSS 基因5’侧翼序列和 Patatin 启动子驱动的三价反义融合基因植物表达载体的构建 | 第45页 |
| 5 植物表达载体转化农杆菌 | 第45-46页 |
| 6 反义融合基因GS_2S_3 对马铃薯的转化 | 第46-48页 |
| ·马铃薯遗传转化再生体系的建立 | 第46页 |
| ·马铃薯组培苗的复壮 | 第46页 |
| ·农杆菌工程菌菌液的准备 | 第46-47页 |
| ·外植体的预培养 | 第47页 |
| ·农杆菌对外植体的遗传转化 | 第47-48页 |
| Ⅳ 结果与分析 | 第48-65页 |
| 1 马铃薯可溶性淀粉合成酶 SSSⅢ基因cDNA 的克隆及序列分析 | 第48-50页 |
| ·马铃薯块茎总RNA 的提取和琼脂糖凝胶电泳检测 | 第48页 |
| ·马铃薯可溶性淀粉合成酶SSSⅢ的克隆及序列分析 | 第48-50页 |
| 2 马铃薯块茎淀粉合成酶SSⅡ基因cDNA 的克隆及序列分析 | 第50-52页 |
| 3 马铃薯淀粉合成酶GBSS 基因5’侧翼序列驱动的GUS 基因的植物表达载体的构建 | 第52-54页 |
| ·马铃薯块茎淀粉合成酶GBSS 基因5’侧翼序列的亚克隆及鉴定 | 第52-53页 |
| ·马铃薯淀粉合成酶GBSS 基因5’侧翼序列驱动的GUS 基因的植物表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 4 马铃薯块茎特异启动子Patatin 驱动的GUS 基因的植物表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·马铃薯块茎特异启动子Patatin 的亚克隆及鉴定 | 第54-55页 |
| ·马铃薯块茎特异启动子Patatin 驱动的GUS 基因的植物表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 5 GBSS 基因cDNA 的鉴定 | 第56页 |
| 6 反义融合基因GS_2S_3 的构建及植物表达载体的构建 | 第56-60页 |
| ·对三个淀粉合成酶基因cDNA 非同源区段的分析 | 第56-57页 |
| ·GBSS 基因和SSS ⅡcDNA 片段的融合结果 | 第57-58页 |
| ·片段GBS-S2 和 SSⅢ基因cDNA 片段融合 | 第58-60页 |
| 7 GBSS 基因5’侧翼序列驱动的反义融合基因GS_2S_3 植物表达载体pBIGSG 的构建 | 第60-61页 |
| 8 块茎特异性启动子Patatin 驱动的反义融合基因GS_2S_3 植物表达载体pBIGSP 的构建 | 第61页 |
| 9 植物表达载体pBIGSG、pBIGSP 转化根癌农杆菌LBA4404 | 第61-62页 |
| 10 反义融合基因GS_2S_3 植物表达载体对马铃薯的遗传转化 | 第62-64页 |
| ·培养基的筛选 | 第62-63页 |
| ·预培养时间对遗传转化的影响 | 第63页 |
| ·农杆菌浓度、浸染时间及共培养时间对遗传转化的影响 | 第63-64页 |
| 讨论 | 第64-65页 |
| Ⅴ 结论 | 第65-66页 |
| Ⅵ 参考文献 | 第66-70页 |
| 图版 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 导师简介 | 第73-74页 |
