| 摘要 | 第1-4页 |
| SUMMARY | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 一、性别决定机制 | 第10-13页 |
| 1. 性别决定的过程 | 第10页 |
| 2. 性别决定的遗传学机制 | 第10-13页 |
| ·SRY 基因与性别决定 | 第11-12页 |
| ·SOX 基因家族与性别决定 | 第12-13页 |
| 二、性别控制技术 | 第13-19页 |
| 1. 人工授精过程中的性别控制——X、Y 精子的分离 | 第13-14页 |
| ·梯度法 | 第13页 |
| ·流式细胞分选法 | 第13-14页 |
| ·免疫法 | 第14页 |
| 2. 调节受精环境法 | 第14-15页 |
| 3. 胚胎移植阶段的性别控制——早期胚胎的性别鉴定 | 第15-19页 |
| ·细胞学方法 | 第15页 |
| ·X-联结酶测定法 | 第15-16页 |
| ·免疫学方法 | 第16页 |
| ·雄性特异性DNA 探针法 | 第16-17页 |
| ·PCR 扩增法 | 第17-18页 |
| ·RAPD 技术 | 第18-19页 |
| ·LAMP 法 | 第19页 |
| 三、PCR 法鉴定牛早期胚胎性别存在的问题 | 第19-20页 |
| 四、本实验的目的 | 第20-21页 |
| 第二章 实验部分 | 第21-52页 |
| 实验一 利用性别决定基因（SRY）和酪蛋白α_(s1)基因（CSN1S1）进行牛早期胚胎性别鉴定的研究 | 第21-39页 |
| 一、多重PCR 鉴定牛早期胚胎性别的优化研究 | 第21-34页 |
| （一） 引言 | 第21页 |
| （二） 材料与方法 | 第21-28页 |
| 1. 试验材料 | 第21-24页 |
| ·组织样品 | 第21页 |
| ·胚胎 | 第21-22页 |
| ·药品 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·主要溶液 | 第22-24页 |
| 2 主要试验方法 | 第24-28页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·牛总基因组DNA 的提取 | 第25页 |
| ·提取牛总基因组DNA 的浓度和纯度的检测 | 第25页 |
| ·PCR 体系的建立 | 第25-26页 |
| ·PCR 体系的优化 | 第26-27页 |
| ·优化后的PCR 体系的应用 | 第27-28页 |
| （三） 结果与分析 | 第28-34页 |
| 1. 牛基因组DNA 的提取与鉴定 | 第28页 |
| 2. PCR 优化结果与分析 | 第28-33页 |
| ·最佳退火温度 | 第28-29页 |
| ·不同引物浓度对双重PCR 的影响 | 第29-30页 |
| ·最佳Mg~(2+)浓度的筛选 | 第30-31页 |
| ·最佳Taq 酶浓度的筛选 | 第31页 |
| ·不同循环数对多重PCR 的影响 | 第31-33页 |
| 3. 优化后体系的应用 | 第33-34页 |
| ·优化体系灵敏度检测结果 | 第33页 |
| ·优化后体系扩增的准确率与稳定性 | 第33-34页 |
| ·淋巴细胞扩增结果 | 第34页 |
| ·胚胎细胞扩增效果 | 第34页 |
| 二、多重巢式PCR 鉴定牛早期胚胎性别的优化研究 | 第34-39页 |
| （一） 前言 | 第34-35页 |
| （二） 材料与方法 | 第35-37页 |
| 1. 试验材料（同上） | 第35页 |
| 2. 试验方法 | 第35-37页 |
| ·牛基因组DNA 的提取及检测（同上） | 第35页 |
| ·多重巢式PCR 体系的建立 | 第35-36页 |
| ·PCR 反应程序 | 第36-37页 |
| 3. 多重巢式PCR 体系的应用 | 第37页 |
| ·牛基因组DNA 的扩增 | 第37页 |
| ·淋巴细胞扩增 | 第37页 |
| ·胚胎细胞扩增 | 第37页 |
| （三） 结果与分析 | 第37-39页 |
| 1. 多重巢式PCR 扩增牛基因组DNA 的结果 | 第37-38页 |
| 2. 多重巢式PCR 扩增牛早期胚胎DNA 的结果 | 第38-39页 |
| 实验二 利用Y 染色体重复序列和肿瘤坏死因子（TNFα）进行牛早期胚胎性别鉴定的研究 | 第39-52页 |
| 一、Y 染色体重复序列和肿瘤坏死因子(TNFα)多重PCR | 第39-48页 |
| （一） 前言 | 第39-40页 |
| （二） 材料与方法 | 第40-43页 |
| 1. 试验材料（同试验一） | 第40页 |
| 2. 主要试验方法（同试验一） | 第40-43页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·牛基因组DNA 的提取及纯度检测（同实验一） | 第40页 |
| ·PCR 体系的建立 | 第40-41页 |
| ·PCR 体系的优化 | 第41-42页 |
| ·优化后体系的应用 | 第42-43页 |
| （三） 结果与分析 | 第43-48页 |
| 1. 最佳退火温度筛选结果 | 第43页 |
| 2. 最佳引物浓度搭配筛选结果 | 第43-44页 |
| 3. Mg~(2+)浓度的影响 | 第44-45页 |
| 4. 最佳Taq 酶的量 | 第45页 |
| 5. 循环数对PCR 的影响 | 第45-46页 |
| 6. 优化体系灵敏度检测结果 | 第46-47页 |
| 7. 优化后体系扩增的准确率与稳定性 | 第47-48页 |
| 8. 胚胎细胞扩增结果 | 第48页 |
| 二、多重巢式PCR 鉴定牛早期胚胎性别的优化研究 | 第48-52页 |
| （一） 前言 | 第48-49页 |
| （二） 材料与方法 | 第49-50页 |
| 1. 试验材料 | 第49页 |
| 2. 主要试验方法 | 第49-50页 |
| ·多重巢式PCR 基准体系的建立 | 第49-50页 |
| ·不同的扩增方法对巢式PCR 扩增反应的影响的研究 | 第50页 |
| ·胚胎细胞扩增（同以上实验） | 第50页 |
| （三） 结果与分析 | 第50-52页 |
| 1. 不同扩增方法的扩增结果 | 第50-51页 |
| 2. 胚胎细胞扩增结果 | 第51-52页 |
| 第三章 讨论与结论 | 第52-55页 |
| 一、讨论 | 第52-54页 |
| 1. 胚胎性别鉴定雄性特异性基因的选择及引物设计 | 第52-53页 |
| 2. PCR 扩增方式的选择 | 第53页 |
| 3. PCR 体系的优化 | 第53-54页 |
| 二、结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
| 导师简介 | 第61-63页 |
