| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 绪论 | 第8-21页 |
| ·金属硫蛋白简介 | 第8-14页 |
| ·金属硫蛋白定义、命名、分类 | 第8-9页 |
| ·金属硫蛋白的结构 | 第9-12页 |
| ·金属硫蛋白(MT)的基本特性 | 第12-13页 |
| ·金属硫蛋白(MT)的主要功能 | 第13-14页 |
| ·植物金属硫蛋白 | 第14-17页 |
| ·植物MT分类与表达 | 第14-15页 |
| ·植物MT的功能 | 第15-17页 |
| ·长春花金属硫蛋白(Catharanthus roseus metallothionein，CrMT)的概述 | 第17-19页 |
| ·同源性比对分析 | 第17-18页 |
| ·进化树分析 | 第18页 |
| ·氨基酸组成分析 | 第18页 |
| ·蛋白三维结构预测 | 第18-19页 |
| ·疏水性分析 | 第19页 |
| ·研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 2 长春花CrMT基因的原核表达载体的构建 | 第21-30页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·主要试剂与酶类 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-27页 |
| ·目的蛋白CrMT-1及引物设计 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增目的蛋白CrMT-1 | 第23页 |
| ·PCR产物纯化 | 第23-24页 |
| ·pGEX-6P-1质粒抽提 | 第24-25页 |
| ·pGEX-6P-1-CrMT重组质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·结果 | 第27-29页 |
| ·扩增目的基因CrMT-1的鉴定 | 第27-28页 |
| ·PCR鉴定CrMT-1阳性转化子 | 第28页 |
| ·重组质粒pGEX-6P-1-CrMT的鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pGEX-6p-1-CrMT测定结果 | 第29页 |
| ·本章小结 | 第29-30页 |
| 3 长春花MT在大肠杆菌中的融合表达及其耐受重金属离子的特性 | 第30-42页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·菌株及质粒 | 第30页 |
| ·实验试剂 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-35页 |
| ·重组菌的表达筛选 | 第31-32页 |
| ·蛋白质的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第32-33页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第33页 |
| ·GST-CrMT融合蛋白的大量表达、纯化及鉴定 | 第33-34页 |
| ·Western blotting分析 | 第34页 |
| ·检测表达融合蛋白的大肠杆菌对重金属离子的耐受性 | 第34-35页 |
| ·实验结果与分析 | 第35-40页 |
| ·重组菌的表达筛选 | 第35页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第35-38页 |
| ·GST-CrMT融合蛋白的纯化 | 第38页 |
| ·Western blotting分析 | 第38-39页 |
| ·GST-CrMT融合蛋白在大肠杆菌中对重金属离子的耐受性 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-42页 |
| 4 CrMT基因编码的蛋白在酵母细胞中的定位 | 第42-48页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·菌株及载体 | 第42页 |
| ·酶和试剂 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·质粒pYES2-CrMT-GFP的构建 | 第42-44页 |
| ·酵母细胞的培养 | 第44页 |
| ·活细胞显微镜观察 | 第44-45页 |
| ·实验结果与分析 | 第45-47页 |
| ·质粒pYES2-GFP和pYES2-CrMT-GFP的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·CrMT基因编码的蛋白在酵母细胞中的定位 | 第45-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
