| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-40页 |
| 1 生物分析的标记策略 | 第9-16页 |
| ·直接标记 | 第10页 |
| ·酶标记 | 第10-14页 |
| ·纳米颗粒作为标记物 | 第14-15页 |
| ·分离技术的耦联 | 第15-16页 |
| ·小结 | 第16页 |
| 2 标记酶及其研究进展 | 第16-24页 |
| ·标记酶的概述 | 第17页 |
| ·标记酶的种类 | 第17-21页 |
| ·酶标记的方法 | 第21-23页 |
| ·常用的检测方法 | 第23-24页 |
| ·小结 | 第24页 |
| 3 蛋白激酶检测方法研究进展 | 第24-31页 |
| ·蛋白激酶简介及分类 | 第25-26页 |
| ·蛋白激酶检测方法研究进展 | 第26-31页 |
| ·小结 | 第31页 |
| 4 磷酸化蛋白质组富集方法研究进展 | 第31-40页 |
| ·磷酸化蛋白质组富集的概述 | 第34-35页 |
| ·固定金属离子亲和层析(Immobilized Metal Affinity Chromatography,IMAC) | 第35-36页 |
| ·特异的化学衍生物 | 第36-39页 |
| ·免疫沉淀反应 | 第39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第二章 甲基对硫磷水解酶作为新标记用酶的研究 | 第40-86页 |
| 1 材料与方法 | 第42-58页 |
| ·材料 | 第42-45页 |
| ·实验方法 | 第45-58页 |
| 2 结果 | 第58-83页 |
| ·MPH基因片段表达载体的构建 | 第58-61页 |
| ·MPH的纯化 | 第61-62页 |
| ·MPH性质的测定 | 第62-67页 |
| ·scFv A1和scFv A1E基因表达载体的构建 | 第67-70页 |
| ·MPH-L-A1E基因表达载体的构建 | 第70-73页 |
| ·蛋白质在大肠杆菌中的表达 | 第73-74页 |
| ·蛋白质表达的Western Blot鉴定 | 第74-75页 |
| ·scFv A1E和MPH-L-A1E的纯化 | 第75-76页 |
| ·MPH-L-A1E与MPH和scFv A1E性质的比较 | 第76-81页 |
| ·MPH-L-A1E检测实际样品 | 第81-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| ·MPH作为一种新的标记酶 | 第83-84页 |
| ·MPH-L-A1E的构建以及其在大肠杆菌中的表达 | 第84页 |
| ·MPH-L-A1E检测WSSV | 第84-85页 |
| 4 小结 | 第85-86页 |
| 第三章 基于Fe~(3+)-NTA修饰芯片的蛋白激酶活性检测 | 第86-103页 |
| 1 材料与方法 | 第88-93页 |
| ·材料 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89-93页 |
| 2 结果 | 第93-100页 |
| ·最佳金属离子的确定 | 第93页 |
| ·Fe~(3+)-NTA芯片的制备 | 第93-94页 |
| ·上样缓冲液(Loading buffer)的选择 | 第94-95页 |
| ·基于Fe~(3+)-NTA芯片的磷酸化肽检测 | 第95-96页 |
| ·磷酸化短肽检测限的确定 | 第96-97页 |
| ·基于Fe~(3+)-NTA芯片的蛋白激酶活性检测 | 第97-100页 |
| 3 讨论 | 第100-102页 |
| ·最佳金属离子的选择 | 第100-101页 |
| ·Running buffer的选择 | 第101页 |
| ·Fe~(3+)-NTA修饰芯片作为通用的磷酸化肽(或蛋白)识别元件 | 第101-102页 |
| ·Fe~(3+)-NTA芯片用于激酶检测 | 第102页 |
| 4 小结 | 第102-103页 |
| 第四章 结论 | 第103-105页 |
| 1 发展了一种新的标记用酶——甲基对硫磷水解酶 | 第103页 |
| 2 发展了一种新的蛋白激酶活性的检测方法——基于Fe~(3+)-NTA修饰芯片的蛋白激酶活性的检测方法 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-116页 |
| 待发表文章目录 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
