| 内容提要 | 第1-7页 |
| 引言 | 第7-14页 |
| 1 GDNF 的分子生物学特性 | 第8-9页 |
| 2 GDNF 的分布 | 第9页 |
| 3 GDNF 的基因表达与调控 | 第9页 |
| 4 GDNF 的生物学活性 | 第9-11页 |
| 5 GDNF在帕金森病中的应用 | 第11-12页 |
| 6 GDNF 与神经肌肉疾病 | 第12页 |
| 7 GDNF 与免疫系统的关系 | 第12-14页 |
| 材料和方法 | 第14-30页 |
| 1 材料 | 第14-19页 |
| ·标本 | 第14页 |
| ·菌株与质粒 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-18页 |
| ·主要仪器 | 第18-19页 |
| 2 方法 | 第19-30页 |
| ·样本制备 | 第19页 |
| ·从组织中提取mRNA | 第19-20页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物电泳 | 第22页 |
| ·制备大肠杆菌JM109 感受态细胞 | 第22-23页 |
| ·pET-28a（+）空质粒的扩增 | 第23页 |
| ·试剂盒回收PCR 双酶切产物 | 第23-25页 |
| ·原核表达载体pET-28a 双酶切产物与PCR 双酶切产物连接 | 第25页 |
| ·原核表达重组质粒pET-28a-GDNF 转化 | 第25页 |
| ·重组质粒的扩增及鉴定 | 第25-26页 |
| ·酶切产物与PGEM-T 克隆载体连接 | 第26页 |
| ·酶切产物与PGEM-T 克隆载体连接后的产物的转化、培养、质粒重提 | 第26页 |
| ·取阳性重组质粒送上海生工测序分析 | 第26-27页 |
| ·原核表达重组质粒pET-28a-GDNF 转化进入BL21 细胞 | 第27页 |
| ·pET-28a-GDNF/BL21 的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·pET-28a-GDNF/BL21 的诱导表达产物的简单鉴定 | 第28-29页 |
| ·目的蛋白的粗提 | 第29页 |
| ·目的蛋白的生物学活性鉴定 | 第29-30页 |
| 结果 | 第30-41页 |
| 1 基因引物序列设计 | 第30页 |
| 2 目的DNA 片段PCR 产物琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第30-31页 |
| 3 重组质粒及 NheⅠ和 HindIII 酶切鉴定琼脂糖凝胶电泳图 | 第31-33页 |
| 4 连接目的基因的T4 重组质粒测序及分析结果 | 第33-37页 |
| 5 表达载体分泌蛋白的SDS-PAGE 电泳结果 | 第37-38页 |
| 6 目的蛋白的粗提 | 第38-40页 |
| 7 表达的蛋白对鸡胚背根神经节的影响 | 第40-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 中文摘要 | 第51-53页 |
| Abstract | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
