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根结线虫寄生真菌资源与淡紫拟青霉PL89的研究

中文摘要第1-21页
英文摘要第21-24页
第一章 根结线虫食线虫菌物研究概况第24-45页
 第一节 根结线虫食线虫菌物资源的重要性第24-30页
  1 根结线虫的为害与防治第24-25页
   ·根结线虫的发生与为害第24页
   ·根结线虫病害的防治第24-25页
  2 根结线虫的食线虫菌物资源第25-26页
   ·食线虫菌物种类与分类第25页
   ·我国的食线虫菌物资源研究简况第25-26页
  3 3种常见的食线虫真菌第26-30页
   ·淡紫拟青霉〔Paecilomyces lilacinus(Thom.)Samson〕第26-28页
     ·分类地位和寄主第26页
     ·生物学特征第26-27页
     ·对植物寄生线虫的致病机制与控制作用第27-28页
     ·生态学第28页
     ·安全性评价第28页
   ·厚垣孢普可尼亚菌(Pochonia chlamydosporia)第28-30页
     ·分类地位和寄主第28-29页
     ·生物学特征第29页
     ·时植物寄生线虫的致病机制与拉制作用第29-30页
   ·镰刀菌(Fusarium spp.)第30页
 第二节 国内外真菌杀线虫剂的开发现状与问题第30-44页
  1 食线虫菌物的利用途径与方法第31-40页
   ·生防菌菌体产品第31-37页
     ·生防菌的培养第31-34页
     ·制剂与剂型第34-37页
   ·代谢产物第37-40页
     ·食线虫菌物的胞外酶第37-39页
     ·食线虫菌物产杀线虫次生代谢物第39-40页
  2 国内外己有的真菌杀线虫剂产品第40-41页
  3 真菌杀线虫剂产业化存在的主要问题第41-44页
   ·菌株的来源与筛选第42页
   ·发酵工艺及成本第42-43页
   ·研发适合的剂型第43页
   ·防效的稳定性第43页
   ·建立标准化质量控制体系第43-44页
 第三节 本课题的立题依据与意义第44-45页
第二章 福建省根结线虫寄生真菌资源第45-56页
 第一节 根结线虫寄生真菌种类鉴定第45-52页
  1 材料与方法第45-46页
   ·样品采集第45页
   ·寄生性真菌分离培养技术第45-46页
     ·含抗生素培养基制备第45页
     ·根结线虫虫体表面消毒方法第45页
     ·寄生性真菌分离培养第45-46页
   ·寄生性真菌的鉴定第46页
  2 结果与分析第46-49页
   ·根结线虫寄生真菌的物种多样性和优势种第46页
   ·根结线虫寄生真菌区系与线虫寄主植物的关系第46页
   ·根结线虫雌虫和卵囊的寄生性真菌区系第46-49页
  3 小结与讨论第49-52页
   ·寄生性真菌分离方法第49页
   ·根结线虫的重要寄生真菌第49-50页
   ·根结线虫寄生真菌的混合种群与利用第50页
   ·镰刀菌的利用前景第50-52页
 第二节 厚垣孢普可尼亚菌的变种第52-56页
  1 材料与方法第52-53页
   ·供试菌株第52页
   ·厚垣孢普可尼亚菌2个变种的鉴定方法第52-53页
     ·PSA平板透明孔观察第52-53页
     ·厚垣孢子及分生孢子扫描电镜观察第53页
   ·2个变种比率与生境分析第53页
  2 结果与分析第53-54页
   ·2个变种的鉴定第53页
   ·2个变种的比率与生境第53-54页
     ·2个变种的比率第53-54页
     ·2个变种的生境第54页
  3 小结与讨论第54-56页
第三章 根结线虫寄生真菌的高效菌株筛选第56-68页
 第一节 淡紫拟青霉优良菌株与生产菌株的筛选第56-62页
  1 材料和方法第56-58页
   ·菌株来源与供试线虫第56页
   ·筛选模型第56页
   ·几丁质平板筛选第56-57页
     ·几丁质胶体制备第56页
     ·几丁质琼脂培养基第56页
     ·产几丁质酶菌株的初筛第56-57页
   ·几丁质酶活测定第57页
     ·几丁质液体培养基第57页
     ·菌株液体培养第57页
     ·几丁质酶活力测定第57页
   ·淡紫拟青霉对根结线虫卵的侵染测定第57-58页
     ·淡紫拟青霉孢子悬浮液的制备第57页
     ·对根结线虫卵的侵染测定第57-58页
   ·数据处理与分析第58页
  2 结果与分析第58-62页
   ·几丁质平板培养筛选结果第58页
   ·几丁质液体培养筛选结果第58页
   ·菌株稳定性第58-61页
     ·产几丁质酶的稳定性第58-59页
     ·菌株遗传稳定性第59-61页
   ·淡紫拟青霉菌株对根结线虫卵的寄生性第61-62页
  3 小结与讨论第62页
   ·产几丁质酶菌株的平板筛选法第62页
   ·创建高产几丁质酶菌株筛选体系第62页
   ·淡紫拟青霉几丁质酶活性与侵染力呈一定的正相关第62页
 第二节 厚垣孢普可尼亚孢优良菌株的筛选第62-68页
  1 材料与方法第62-64页
   ·供试菌株第62-63页
   ·培养基第63页
   ·真菌孢子悬浮液的制备第63页
   ·菌株筛选第63-64页
     ·菌落生长速度测定第63页
     ·菌落生物量的测定方法第63页
     ·蛋白酶明胶平板测定法第63页
     ·几丁质平板筛选第63页
     ·优良菌株筛选指标第63-64页
   ·不同营养水平培养基对初筛菌株生长的影响第64页
  2 结果与分析第64-66页
   ·高产蛋白酶菌株初步筛选结果第64-65页
   ·高产蛋白酶和几丁质酶的菌株复筛第65页
   ·不同营养水平对5株初筛菌株的影响第65-66页
  3 小结与讨论第66-68页
   ·厚垣孢普可尼亚孢优良菌株的筛选方法第66页
   ·菌株间对不同营养的利用能力第66-67页
   ·关于存在和需要进一步研究的问题第67-68页
第四章 淡紫拟青霉菌株 PL89的生物学特性第68-113页
 第一节 PL89的营养特性第68-94页
  1 材料与方法第68-72页
   ·供试菌株第68页
   ·培养基第68-70页
     ·不含碳氮源基础培养基第68页
     ·C/N比(摩尔比)实验培养基第68页
     ·C浓度实验培养基第68页
     ·C源种类实验培养基第68页
     ·N源种类实验培养基第68-69页
     ·基础培养基第69页
     ·主要元素缺培养基第69页
     ·微量元素添加培养基第69-70页
     ·维生素添加培养基第70页
   ·培养方法第70页
     ·平板菌种的制备第70页
     ·真菌孢子悬浮液的制备第70页
     ·接种方法第70页
     ·培养条件第70页
   ·测定方法第70-71页
     ·吐温-80溶液的配制第71页
     ·取样第71页
     ·参数的计测第71页
   ·数据处理第71-72页
  2 结果与分析第72-92页
   ·C/N比(摩尔比)对 PL89生长的影响第72-74页
     ·C/N比(摩尔比)对 PL89液体培养产孢的影响第72-73页
     ·C/N比(摩尔比)时 PL89液体培养菌丝生长的影响第73-74页
    2.l.3 C/N比(摩尔比)时 PL89固体平板生长的影响第74页
   ·C源浓度对 PL89生长的影响第74-77页
     ·C源浓度对 PL89液体培养产孢的影响第74-75页
     ·C源浓度对 PL89液体培养菌丝生长的影响第75-77页
     ·C源浓度对 PL89固体平板生长的影响第77页
   ·C源种类对PL89生长的影响第77-80页
     ·C源种类对 PL89液体培养产孢的影响第77-78页
     ·C源种类劝 PL89液体培养菌丝生长的影响第78-79页
     ·C源种类对 PL89固体平板生长的影响第79-80页
   ·N源种类对PL89生长的影响第80-81页
     ·N源种类对 PL89液体培养产孢的影响第80页
     ·N源种类对 PL89液体培养菌丝生长的影响第80-81页
   ·主要元素缺失对PL89生长的影响第81-84页
     ·主要元素缺失时 PL89液体培养产孢的影响第81-82页
     ·主要元素缺失对 PL89液体菌丝生长的影响第82-83页
     ·主要元素缺失对 PL89固体平板生长的影响第83-84页
   ·元素添加对PL89生长的影响第84-88页
     ·微量元素锌对 PL89生长的影响第84页
     ·微量元素铜对 PL89生长的影响第84-85页
     ·微量元素住对 PL89生长的影响第85-86页
     ·元素镁对 PL89生长的影响第86页
     ·微量元素硼对 PL89生长的影响第86-87页
     ·微量元素铝时 PL89生长的影响第87-88页
   ·维生素对 PL89生长的影响第88-92页
     ·维生素 B_1对 PL89液体培养的影响第88页
     ·维生素 B_2对 PL89液体培养的影响第88-89页
     ·维生素 B_6对 PL89液体培养的影响第89页
     ·维生素C对PL89液体培养的影响第89-90页
     ·维生素叶酸对 PL89液体培养的影响第90-91页
     ·维生素烟酸对 PL89液体培养的影响第91-92页
  3 小结与讨论第92-94页
   ·关于实验的方法第92页
   ·C/N试验结果及意义第92-93页
   ·关于 C源浓度第93页
   ·关于 C源和 N源的种类第93-94页
   ·主要元素和微量元素对 PL89生长的影响第94页
   ·常见水溶性维生素对 PL89生长的影响第94页
 第二节 营养条件对 PL89产几丁质酶的影响第94-101页
  1 材料与方法第94-95页
   ·菌株来源第94页
   ·基础培养基第94-95页
   ·培养基配方单因素试验第95页
     ·几丁质培养基第95页
     ·几丁质有机氮培养基第95页
     ·接种和培养第95页
   ·培养条件正交试验第95页
  2 结果第95-100页
   ·培养基配方单因素试验第95-98页
   ·培养条件优化第98-100页
     ·正交法确定培养条件第98-100页
  3 小结与讨论第100-101页
   ·几丁质形态和细度是影响几丁质酶产量的关键因素第100-101页
   ·几丁质形态与氮源对菌体产几丁质酶能力有交互影响第101页
   ·正交试验建立 PL89产几丁质酶实验室培养体系第101页
 第三节 淡紫拟青霉菌株 PL89对南方根结线虫的寄生性和致病性第101-106页
  1 材料与方法第101-103页
   ·供试菌株第101页
   ·孢子悬浮液和南方根结线虫卵悬浮液的制备第101-102页
   ·菌株 PL89对卵及卵囊的侵染第102-103页
     ·对卵的寄生性测定及光学显微观察第102页
     ·对卵囊的定殖及对卵囊内卵的寄生性测定第102页
     ·对卵及卵囊胶质物定殖的扫描显微观察第102-103页
  2 结果第103-104页
   ·菌株 PL89对卵的寄生性第103页
   ·菌株 PL89对卵囊内卵及卵囊的寄生性第103页
   ·菌株 PL89对卵寄生的扫描电镜观察第103-104页
  3 小结与讨论第104-106页
 第四节 淡紫拟青霉 PL89的抗逆性第106-113页
  1 材料与方法第106-108页
   ·供试菌株第106页
   ·培养基及培养方法第106页
   ·菌落生长速度测定第106页
   ·耐酸碱性的测定第106页
   ·耐盐性的测定第106页
   ·温度对 PL89生长的影响第106-107页
     ·不同温度对 PL89生长的影响第107页
     ·菌株 PL89对高温的耐受性第107页
   ·与化学农药的兼容性测定第107-108页
     ·供试药剂第107页
     ·农药对 PL89生长影响的测定第107-108页
     ·PL89对氯霉素的耐受性第108页
   ·数据处理第108页
  2 结果与分析第108-112页
   ·淡紫拟青霉 PL89对pH值的适合度第108-110页
     ·PL89在不同pH值 PSA培养基中的生长情况第108-109页
     ·PL89在不同pH值几丁质培养基中的生长第109页
     ·PL89在不同pH值明胶培养基中的生长第109-110页
   ·淡紫拟青霉 PL89耐盐性的测定第110页
   ·温度对 PL89生长的影响第110-111页
     ·不同温度条件对 PL89生长的影响第110页
     ·菌株 PL89时高温的耐受性第110-111页
   ·农药对菌株 PL89的影响第111-112页
   ·PL89对氯霉素的耐受性第112页
  3 小结与讨论第112-113页
第五章 功能性培养基的研制第113-125页
 第一节 虾壳粉成分的测定第113-115页
  1 材料与方法第113-114页
   ·虾壳粉第113页
   ·虾壳粉成分的测定第113-114页
     ·有机碳含量的测定第113页
     ·全氮含量的测定第113页
     ·全磷含量的测定第113页
     ·全钾含量的测定第113页
     ·钠、镁、铜、锌含量的测定第113页
     ·含水量的测定第113-114页
  2 结果与分析第114页
   ·虾壳粉营养成分与最适培养基的比较第114页
  3 小结与讨论第114-115页
 第二节 虾壳粉培养基的应用第115-125页
  1 材料与方法第115-116页
   ·供试菌株第115页
   ·供试培养基第115页
     ·固体培养基第115页
     ·液体培养基第115页
   ·PL89在不同培养基中的生长第115-116页
     ·PL89在不同固体平板中的生长第115页
     ·PL89在不同液体培养基中的生长第115-116页
   ·PL89在不同 pH值虾壳粉培养基中的生长第116页
   ·虾壳粉培养基最佳浓度的确定第116页
   ·参数的测定第116页
   ·数据处理与分析第116页
  2 结果与分析第116-123页
   ·PL89在不同培养基中的生长第116-119页
     ·PL89在不同固体平板培养基中的生长第116-117页
     ·PL89在不同液体培养玉中的生长第117-119页
   ·PL89在不同 PH值的虾壳粉液体培养基中的生长情况第119-120页
   ·虾壳粉培养基最适浓度的确定第120-123页
     ·灯壳粉培养基浓度对 PL89产孢的影响第120-121页
     ·虾壳粉培养基浓度对 PL89液体发酵菌丝球形成的影响第121-122页
     ·PL89在不同浓度虾壳粉培养墓中液体发酵pH的变化第122-123页
  3 小结与讨论第123-125页
   ·虾壳粉液体培养基适合菌株PL89的生长第123页
   ·虾壳粉液体培养基具有良好的缓冲性第123页
   ·虾壳粉培养基是廉价环保培养基第123-125页
第六章 淡紫拟青霉菌株 PL89的发酵技术第125-145页
 第一节 淡紫拟青霉液体发酵和微循环产抱第125-136页
  1 材料与方法第125-127页
   ·供试菌株及材料第125页
   ·菌株 PL89摇瓶液体发酵条件第125-126页
     ·接种量第125页
     ·通气量第125页
     ·菌种的菌龄第125-126页
   ·液体发酵罐发酵条件与参数第126页
     ·发酵堆及发酵罐的使用第126页
     ·培养条件第126页
     ·种子、接种量与接种方式第126页
     ·转速与通气流量第126页
   ·淡紫拟青霉菌株 PL89微循环产孢第126-127页
     ·不同培养液与培养方式对 PL89微循环产孢的影响第126-127页
     ·发酵产物的显微观察与测量第127页
   ·实验数据处理第127页
  2 结果与分析第127-134页
   ·接种量对PL89摇瓶发酵的影响第127-129页
     ·接种量对 PL89摇瓶发酵产孢的影响第127-128页
     ·接种量对菌丝球形成的影响第128-129页
   ·通气量对 PL89摇瓶发酵的影响第129-130页
     ·通气量对产孢的影响第129-130页
     ·通气量对菌丝形成的影响第130页
   ·菌种的菌龄对 PL89液体发酵的影响第130-131页
   ·转速与通气流量对菌株 PL89罐发酵的影响第131-132页
   ·淡紫拟青霉菌株 PL89的微循环产孢第132-134页
     ·PL89在灯壳粉培养基中液体发酵产物的形成过程、形态与大小第132-134页
     ·PL89微循环产孢产生的条件第134页
  3 小结与讨论第134-136页
   ·关于PL89摇瓶发酵的条件第134-135页
   ·关于PL89发酵罐发酵条件第135页
   ·PL89的微循环产孢第135-136页
 第二节 淡紫拟青霉双相发酵技术第136-145页
  1 材料与方法第136-138页
   ·供试菌株第136页
   ·组培瓶固体发酵第136-137页
     ·固体培养基筛选第136页
     ·固体发酵装量及培养条件第136页
     ·固体培养接种方法第136-137页
     ·固体培养基基本组分含水量的测定第137页
     ·固体培养影响因素的确定第137页
     ·固体发酵最佳培养基的配方第137页
     ·孢子计数的方法第137页
   ·液相发酵终点的确定第137页
   ·浅盘发酵技术第137-138页
     ·固体培养基的灭菌第137-138页
     ·培养室的消毒第138页
     ·接种第138页
     ·培养方式第138页
   ·实验数据处理第138页
  2 结果与分析第138-144页
   ·固体培养基的筛选第138-140页
   ·固体培养影响因素的确定第140页
   ·固体发酵培养基配方的筛选第140-142页
   ·液相发酵终点的确定第142页
   ·浅盘发酵技术第142-144页
     ·固体浅盘发酵培养方式的确定第142页
     ·固体浅盘发酵培养结果第142-144页
  3 小结与讨论第144-145页
   ·固体培养基的选择第144页
   ·关于发酵终点的选择第144页
   ·影响双相发酵固体发酵的因素第144页
   ·抗污染技术第144-145页
第七章 淡紫拟青霉 PL89可湿性粉剂的研制第145-166页
 第一节 淡紫拟青霉菌 PL89孢子原粉的制备第145-147页
  1 材料与方法第145-146页
   ·供试菌第145页
   ·孢子粉的收获第145页
     ·固体发酵产物的干燥第145页
     ·孢子粉收获第145页
   ·孢子粉质量指标的检测第145-146页
     ·含孢量测定第145-146页
     ·干燥减量(含水量)测定第146页
     ·活孢率测定第146页
   ·数据处理第146页
  2 结果与分析第146-147页
   ·不同干燥方法培养物的含水量的变化第146页
   ·孢子粉的质量指标第146-147页
  3 小结与讨论第147页
 第二节 淡紫拟青霉菌 PL89可湿性粉剂助剂的筛选第147-152页
  1 材料与方法第148-149页
   ·供试菌株第148页
   ·载体的选用第148页
   ·助剂的筛选第148-149页
     ·供试润湿剂第148页
     ·分散剂的选用第148页
     ·助剂对孢子PL89萌发的影响第148-149页
     ·助剂对 PL89生长的影响第149页
   ·数据处理第149页
  2 结果与分析第149-151页
   ·载体的选用第150页
   ·不同助剂对PL89孢子萌发的抑制率第150页
   ·不同助剂对PL89生长的影响第150-151页
  3 小结与讨论第151-152页
   ·载体与助剂选择的原则和依据第151-152页
 第三节 淡紫拟青霉 PL89可湿性粉剂的配伍第152-156页
  1 材料与方法第152-153页
   ·供试材料第152页
     ·供试菌粉第152页
     ·供试助剂第152页
     ·供试填料第152页
   ·配伍正交试验分析润湿性及悬浮率影响因素第152页
   ·制剂的加工第152页
   ·制剂参数的测定第152-153页
  2 结果与分析第153-155页
   ·正交法确定影响润湿时间、悬浮率的因素及配伍比例第153-155页
  3 小结与讨论第155-156页
 第四节 孢子粉及孢子制剂的耐贮性试验第156-158页
  1 材料与方法第156页
   ·孢子粉第156页
   ·孢子制剂第156页
   ·贮存条件及测定方法第156页
  2 结果与分析第156-157页
   ·不同贮存时间含水量及孢子萌发率的变化第156-157页
  3 小结与讨论第157-158页
 第五节 淡紫拟青霉 PL89可湿性粉剂在土壤中渗透性及菌体活力第158-161页
  1 材料与方法第158-159页
   ·供试孢子粉及孢子制剂第158页
   ·菌剂及孢子原粉含菌量测定第158-159页
     ·菌剂及孢子原粉悬浮液的配制第158页
     ·菌剂及孢子原粉的 CFU测定第158-159页
   ·在土壤中的渗透性第159页
  2 结果与分析第159-161页
   ·供试菌剂及孢子原粉含菌量第159页
   ·PL89菌剂及孢子原粉在土壤中的垂直分布第159-160页
   ·PL89菌剂及孢子原粉在土壤中的存活情况第160-161页
  3 小结与讨论第161页
 第六节 淡紫拟青霉菌 PL89可湿性粉剂质量标准第161-166页
  1 材料与方法第161-164页
   ·材料第161-162页
     ·供试材料第161页
     ·主要试验仪器第161页
     ·标准硬水的制备第161-162页
   ·方法第162-164页
     ·孢子原粉的获得第162页
     ·可湿性粉剂的配伍第162页
     ·含孢量的测定第162页
     ·孢子萌发率的测定第162页
     ·干燥减量的测定第162-163页
     ·润湿性的测定第163页
     ·悬浮率的测定第163页
     ·真菌杂菌率的测定第163页
     ·细度的测定第163-164页
  2 结果与分析第164-165页
   ·淡紫拟青霉PL89可湿性粉剂的质量标准第164-165页
     ·孢子原粉及可湿性粉剂的含孢量第164页
     ·孢子萌发率第164页
     ·干燥减量的要求第164页
     ·润湿时间第164页
     ·悬浮率第164页
     ·真菌杂菌率第164页
     ·细度第164页
     ·毒力测定第164-165页
     ·孢子原粉及制剂的有效期第165页
  3 小结与讨论第165-166页
第八章 淡紫拟青霉 PL89菌剂的田间应用及效果评价第166-173页
 第一节 淡紫拟青霉 PL89菌剂对蔬菜根结线虫病的防治效果第166-169页
  1 材料与方法第166-167页
   ·供试菌剂第166页
   ·盆栽、小区及大田防治试验第166-167页
  2 结果与分析第167-168页
   ·PL89菌剂防治黄瓜根结线虫病的盆栽和小区防治效果第167-168页
   ·淡紫拟青霉 PL89可湿性粉剂对黄瓜、番茄根结线虫病的田间防治效果第168页
  3 小结与讨论第168-169页
 第二节 淡紫拟青霉 PL89菌剂的微生态效应第169-173页
  1 材料与方法第169-170页
   ·供试菌株第169页
   ·供试培养基第169页
   ·施用方法及用量第169页
   ·菌株 PL89在黄瓜根际的定殖第169-170页
   ·菌株 PL89对土壤微生物生态的影响第170页
  2 结果与分析第170-171页
   ·菌株 PL89在黄瓜根际的定殖第170-171页
   ·菌株 PL89在根际土壤中的定殖及对根际微生物的影响第171页
  3 小结与讨论第171-173页
第九章 总结与展望第173-177页
 1 主要研究结果第173-175页
 2 特色第175页
 3 有待进一步研究的问题展望第175-177页
参考文献第177-189页
附录第189-190页
 攻读博士学位期间己发表的论文、取得的成果及所获得的专利第189-190页
致谢第190页

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