| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第1章 前言 | 第14-18页 |
| 第2章 材料和方法 | 第18-28页 |
| ·材料 | 第18-21页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·试剂配制 | 第18-20页 |
| ·质粒、菌株和细胞株 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-28页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第21-24页 |
| ·融合蛋白的原核表达和纯化 | 第24-25页 |
| ·蛋白内化的细胞学实验 | 第25页 |
| ·蛋白诱导细胞因子分泌的功能验证实验 | 第25-26页 |
| ·HMGB1的真核表达及细胞内定位移位 | 第26-27页 |
| ·细胞荧光染料和特异性抑制剂的使用 | 第27-28页 |
| 第3章 结果 | 第28-46页 |
| ·HMGB1内化活性的鉴定 | 第28-30页 |
| ·重组质粒pET14b-MCS-HMGB1-EGFP的鉴定 | 第28页 |
| ·HMGB1-EGFP融合蛋白的原核表达和纯化 | 第28-29页 |
| ·HMGB1-EGFP融合蛋白内化进入Hela细胞 | 第29-30页 |
| ·HMGB1蛋白内化机制的研究 | 第30-35页 |
| ·HMGB1与依赖包涵素的内吞途径的共定位研究 | 第30-31页 |
| ·HMGB1与脂筏的共定位研究 | 第31页 |
| ·HMGB1与溶酶体的共定位研究 | 第31-34页 |
| ·不同抑制剂对HMGB1内化活性的影响 | 第34-35页 |
| ·介导HMGB1内化的功能域的鉴定 | 第35-38页 |
| ·HMGB1上各片段EGFP融合表达载体的鉴定 | 第36页 |
| ·HMGB1上各片段EGFP融合蛋白的表达和纯化 | 第36-37页 |
| ·HMGB1不同结构域的内化活性 | 第37-38页 |
| ·HMGB1蛋白CIF1段内化机制的研究 | 第38-40页 |
| ·CIF1段与依赖包涵素的内吞途径的共定位结果 | 第38页 |
| ·CIF1段与胞膜窖介导的内吞途径的共定位结果 | 第38页 |
| ·不同抑制剂对CIF1段内化活性的影响 | 第38-40页 |
| ·HMGB1蛋白内化行为与功能相关性的研究 | 第40-43页 |
| ·HMGB1蛋白对HUVEC细胞表达释放IL-6的影响 | 第41页 |
| ·不同抑制剂对HMGB1诱导HUVEC释放IL-6的影响 | 第41-42页 |
| ·HMGB1不同结构域对HUVEC释放IL-6的影响 | 第42-43页 |
| ·HMGB1细胞内定位及移位 | 第43-46页 |
| ·构建载体的鉴定 | 第44页 |
| ·HA-HMGB1-EGFP在293A细胞中的表达、定位和刺激后移位 | 第44-46页 |
| 第4章 讨论 | 第46-57页 |
| ·HMGB1—脓毒症晚期重要的促炎介质 | 第46-48页 |
| ·内化的研究进展和细胞因子内化现象 | 第48-50页 |
| ·HMGB1的内化活性及其机制 | 第50-51页 |
| ·CIF1—有效介导HMGB1内化的功能域 | 第51-53页 |
| ·HMGB1内化与其炎症反应功能 | 第53-54页 |
| ·关于蛋白内化后命运的问题 | 第54-55页 |
| ·全文小结 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 英文缩写词表 | 第63-65页 |
| 综述 | 第65-78页 |
| 攻读学位期间成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
