| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1.前言 | 第11-18页 |
| ·概述 | 第11-12页 |
| ·前人研究进展 | 第12-17页 |
| ·植物的冷胁迫反应 | 第12-13页 |
| ·马铃薯低温糖化的生理生化机制 | 第13-16页 |
| ·低温下碳水化合物代谢途径中相关酶活性的变化 | 第13-15页 |
| ·淀粉粒结构与低温糖化的关系 | 第15页 |
| ·马铃薯块茎“低温糖化”的渗透膜理论 | 第15-16页 |
| ·抑制差减杂交技术 | 第16-17页 |
| ·SSH技术的原理 | 第16页 |
| ·SSH技术的优缺点评价 | 第16页 |
| ·SSH技术的应用 | 第16-17页 |
| ·研究的目的意义 | 第17页 |
| ·研究内容 | 第17-18页 |
| 2.材料和方法 | 第18-26页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·处理方法 | 第18页 |
| ·还原糖含量的测定 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·操作方法 | 第18-19页 |
| ·制作标准曲线 | 第18页 |
| ·还原糖的测定 | 第18页 |
| ·计算结果 | 第18-19页 |
| ·马铃薯块茎总RNA的提取和MRNA的分离 | 第19-20页 |
| ·马铃薯块茎总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·试剂及其配制 | 第19页 |
| ·操作方法 | 第19-20页 |
| ·mRNA分离 | 第20页 |
| ·抑制差减杂交 | 第20-22页 |
| ·cDNA的合成 | 第20页 |
| ·Rsa Ⅰ酶切 | 第20页 |
| ·接头连接 | 第20-21页 |
| ·接头连接效率检测 | 第21页 |
| ·第一次差减杂交 | 第21页 |
| ·第二次差减杂交 | 第21-22页 |
| ·第一次PCR扩增 | 第22页 |
| ·第二次PCR扩增 | 第22页 |
| ·差减效率的PCR扩增检测 | 第22页 |
| ·差减文库的生成 | 第22-23页 |
| ·差减文库的PCR扩增筛选 | 第23页 |
| ·差减基因片段的反向NORTHERN杂交筛选 | 第23-24页 |
| ·探针标记 | 第23页 |
| ·点膜 | 第23页 |
| ·杂交 | 第23-24页 |
| ·预杂交 | 第23页 |
| ·杂交 | 第23页 |
| ·洗膜 | 第23-24页 |
| ·显色 | 第24页 |
| ·差异表达克隆的挑取及测序 | 第24页 |
| ·序列同源性检索 | 第24页 |
| ·差异表达基因的RT-PCR验证 | 第24-26页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第24-25页 |
| ·特异引物的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 3.结果和分析 | 第26-37页 |
| ·供试材料还原糖含量 | 第26页 |
| ·块茎总RNA提取方法的改进 | 第26-28页 |
| ·差减文库构建 | 第28-32页 |
| ·mRNA的分离与质量检测 | 第28页 |
| ·合成的双链cDNA酶切前后的检测 | 第28-29页 |
| ·接头连接效率检测 | 第29页 |
| ·两次PCR扩增产物检测 | 第29页 |
| ·差减效率的PCR扩增检测 | 第29-31页 |
| ·文库装载和克隆挑选 | 第31-32页 |
| ·文库初步筛选 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增筛选 | 第32页 |
| ·反向Northern筛选 | 第32-33页 |
| ·测序结果及其同源性分析 | 第33-34页 |
| ·同源性检索 | 第33-34页 |
| ·已测序EST序列的分类 | 第34页 |
| ·RT-PCR验证差异基因 | 第34-37页 |
| 4.讨论 | 第37-42页 |
| ·马铃薯块茎总RNA的提取 | 第37页 |
| ·差减文库的构建 | 第37-38页 |
| ·马铃薯耐低温糖化相关基因的探讨 | 第38-41页 |
| ·糖酵解与低温糖化 | 第39页 |
| ·硫氧还蛋白与低温糖化 | 第39-40页 |
| ·14-3-3蛋白与低温糖化 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 附录A：抑制差减杂交技术的原理示意图 | 第47-48页 |
| 附录B：差减文库所用接头和装载信息 | 第48-49页 |
| 附录C：差异片段与已知基因同源性比较结果(文库CW) | 第49-52页 |
| 附录D：差异片段与已知基因同源性比较结果(文库CE) | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55页 |