| 独创性声明 | 第1页 |
| 关于论文使用授权的说明 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 前言 | 第10-27页 |
| 1 水稻雄性不育的遗传机理 | 第11-13页 |
| ·三型学说 | 第12-13页 |
| ·二型学说 | 第13页 |
| ·其他学说 | 第13页 |
| 2 水稻雄性不育的分子机理 | 第13-15页 |
| ·线粒体基因组与水稻雄性不育 | 第14页 |
| ·类线粒体DNA与水稻雄性不育 | 第14-15页 |
| ·线粒体基因体外翻译产物与水稻雄性不育 | 第15页 |
| ·细胞核基因与水稻雄性不育 | 第15页 |
| 3 杂交优势利用的方法 | 第15-16页 |
| ·三系法 | 第15页 |
| ·两系法 | 第15-16页 |
| ·一系法 | 第16页 |
| 4 杂交水稻种子检验标准和品种鉴定的方法 | 第16-25页 |
| ·杂交水稻种子检验标准 | 第16页 |
| ·杂交水稻品种鉴定技术及其研究进展 | 第16-21页 |
| ·目前生产上应用的纯度检验方法 | 第17-18页 |
| ·种子形态鉴定法 | 第17页 |
| ·苯酚染色法 | 第17页 |
| ·幼苗鉴定法 | 第17页 |
| ·田间小区种植鉴定 | 第17-18页 |
| ·现代纯度检验方法分析研究 | 第18-21页 |
| ·生化技术——同工酶电泳法 | 第18页 |
| ·DNA指纹技术 | 第18-21页 |
| ·RFLP | 第18-19页 |
| ·微卫星DNA | 第19页 |
| ·RAPD | 第19-20页 |
| ·AFLP | 第20页 |
| ·SNP(单核苷酸多态性)及其检测方法 | 第20-21页 |
| ·实时荧光PCR技术 | 第21-25页 |
| ·荧光探针的技术原理 | 第21页 |
| ·荧光PCR所用探针 | 第21-25页 |
| ·TaqMan探针 | 第22-23页 |
| ·Amplisensor | 第23-24页 |
| ·Molecular beacon | 第24页 |
| ·杂交双探针 | 第24-25页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 材料和方法 | 第27-38页 |
| 1 材料 | 第27页 |
| 2 试剂仪器 | 第27-29页 |
| ·供试的载体、宿主菌株及载体 | 第27页 |
| ·供试酶类及试剂盒 | 第27页 |
| ·供试分子量标准 | 第27页 |
| ·其他供试生化及分子生物学试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27-29页 |
| ·引物及探针 | 第29页 |
| 3 试验方法 | 第29-38页 |
| ·种子的催芽及栽培 | 第29页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·DNA提取 | 第30-31页 |
| ·叶片DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·CTAB法提取叶片DNA | 第30页 |
| ·华舜试剂盒法提取叶片DNA | 第30-31页 |
| ·种子DNA的直接提取 | 第31页 |
| ·大量种子DNA的提取 | 第31页 |
| ·少量种子DNA的提取 | 第31页 |
| ·引物的设计 | 第31页 |
| ·普通PCR反应的验证 | 第31-32页 |
| ·PCR产物电泳分析 | 第32页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第32-34页 |
| ·PCR产物的回收 | 第32页 |
| ·PCR产物连接 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第33页 |
| ·克隆的筛选 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取 | 第34页 |
| ·测序及比对 | 第34页 |
| ·实时荧光PCR检测方法的建立 | 第34-38页 |
| ·TaqMan探针与引物的设计和合成 | 第34-35页 |
| ·实时荧光PCR检测 | 第35-36页 |
| ·反应体系 | 第35页 |
| ·实时荧光PCR检测体系优化 | 第35页 |
| ·反应体系参数的优化 | 第35页 |
| ·专化性测试 | 第35页 |
| ·探针灵敏度及准确性的测试 | 第35-36页 |
| ·纯度检测 | 第36页 |
| ·SDS软件的设置 | 第36页 |
| ·数据分析和结果输出 | 第36-38页 |
| 结果及分析 | 第38-46页 |
| 1 总DNA提取结果 | 第38-39页 |
| 2 普通PCR结果 | 第39-46页 |
| ·不育相关片段R_(2-630)WA的普通PCR验证 | 第39-40页 |
| ·不育相关片段R_(2-630)WA的测序验证 | 第40-41页 |
| ·探针P3-14专化性测试 | 第41-42页 |
| ·RTF-PCR体系的优化 | 第42-43页 |
| ·灵敏度测试 | 第43页 |
| ·单粒检测准确性的测试 | 第43页 |
| ·对不同纯度水稻种子的检测 | 第43-44页 |
| ·对未知纯度种子的检测 | 第44-46页 |
| 讨论 | 第46-50页 |
| 1 目的基因或DNA片段的选取 | 第46-47页 |
| 2 核酸的提取 | 第47页 |
| 3 PCR反应条件的优化 | 第47-48页 |
| 4 关于PCR产物的克隆及序列测定 | 第48页 |
| 5 实时荧光PCR技术 | 第48-49页 |
| 6 荧光PCR检测的优点及不足 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 缩略语表 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 个人简历 | 第56页 |