| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-35页 |
| ·琥珀酸的理化性质、功能和用途 | 第10-12页 |
| ·琥珀酸的理化性质 | 第10-11页 |
| ·琥珀酸的功能和用途 | 第11-12页 |
| ·琥珀酸的生产方法 | 第12-14页 |
| ·化学合成法 | 第12页 |
| ·微生物发酵法及其优势 | 第12-14页 |
| ·琥珀酸及其衍生物的潜在应用及其成本分析和市场展望 | 第14-17页 |
| ·琥珀酸衍生物的市场分析 | 第14-15页 |
| ·生物转化法生产琥珀酸的成本分析 | 第15-17页 |
| ·产琥珀酸基因工程菌构建的进展和国内外研究现状 | 第17-24页 |
| ·产琥珀酸厌氧螺菌 | 第18-20页 |
| ·产琥珀酸放线杆菌 | 第20页 |
| ·大肠杆菌 | 第20-24页 |
| ·其它菌株 | 第24页 |
| ·代谢工程和系统生物学 | 第24-28页 |
| ·代谢工程与系统生物学 | 第24-27页 |
| ·代谢通量分析 | 第27-28页 |
| ·本文所采用的大肠杆菌基因工程技术概述 | 第28-30页 |
| ·λRed 基因一步敲除技术 | 第28-30页 |
| ·p1 噬菌体转导技术 | 第30页 |
| ·共享生物信息学资源介绍 | 第30-32页 |
| ·Biocyc | 第30-31页 |
| ·KEGG | 第31-32页 |
| ·本文主要技术路线 | 第32-35页 |
| ·琥珀酸菌种研究的分析和本文选取的出发菌 | 第32页 |
| ·本文所选用的大肠杆菌改良策略 | 第32-33页 |
| ·本文主要技术路线 | 第33-35页 |
| 第二章 ptsG 基因敲除对大肠杆菌发酵及生长特性的影响及其改进 | 第35-60页 |
| ·实验材料 | 第36-41页 |
| ·菌种和质粒 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·主要溶液 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-51页 |
| ·实验结果与讨论 | 第51-59页 |
| ·ptsG 基因敲除及其它质粒的构建 | 第51-55页 |
| ·ptsG 基因敲除菌的生长及发酵特性研究 | 第55-57页 |
| ·表达半乳糖渗透酶和葡萄糖激酶对TUQ2 生长和发酵特性的影响 | 第57-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第三章 丙酮酸羧化酶对琥珀酸产量的影响 | 第60-71页 |
| ·实验材料 | 第60-62页 |
| ·菌种和质粒 | 第60-61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·培养基 | 第61页 |
| ·主要溶液 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-64页 |
| ·实验结果与讨论 | 第64-70页 |
| ·枯草芽孢杆菌丙酮酸羧化酶基因的克隆与质粒pQZ6 的构建 | 第64-66页 |
| ·丙酮酸羧化酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第66-68页 |
| ·丙酮酸羧化酶基因在大肠杆菌TUQ2 中的表达 | 第68页 |
| ·丙酮酸羧化酶基因和半乳糖渗透酶在大肠杆菌TUQ2 中的共表达 | 第68-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 细胞内氧化还原水平对大肠杆菌厌氧代谢产物的影响 | 第71-89页 |
| ·实验材料 | 第74-76页 |
| ·菌种和质粒 | 第74-75页 |
| ·主要仪器 | 第75页 |
| ·主要试剂 | 第75页 |
| ·培养基 | 第75-76页 |
| ·主要溶液 | 第76页 |
| ·实验方法 | 第76-78页 |
| ·实验结果与讨论 | 第78-88页 |
| ·不同氧化还原态底物对发酵产物的影响 | 第78-79页 |
| ·表达甲酸脱氢酶对大肠杆菌的影响研究 | 第79-84页 |
| ·adhE 基因敲除菌的构建以及特点 | 第84-86页 |
| ·adhE基因敲除菌中表达甲酸脱氢酶 | 第86-87页 |
| ·TUQ2 中表达甲酸脱氢酶 | 第87-88页 |
| ·本章小结 | 第88-89页 |
| 第五章 通量平衡分析和目标靶点预测 | 第89-106页 |
| ·实验材料 | 第90-91页 |
| ·菌种及质粒 | 第90-91页 |
| ·主要仪器 | 第91页 |
| ·主要试剂 | 第91页 |
| ·培养基 | 第91页 |
| ·主要溶液 | 第91页 |
| ·实验方法 | 第91-95页 |
| ·实验结果与讨论 | 第95-104页 |
| ·基于基因组规模的大肠杆菌琥珀酸理论最大产量预测 | 第95-98页 |
| ·基于基因组规模的产琥珀酸最优途径预测 | 第98页 |
| ·用于湿实验的代谢通量模型分析 | 第98-99页 |
| ·出发菌株的代谢通量分析以及和理论最优途径的比较 | 第99页 |
| ·菌种TUQ2、W1485/pQZ6 的代谢通量分析以及和理论最优途径的比较 | 第99-101页 |
| ·菌种 TUQ2/pQZ6 的代谢通量分析以及和理论最优途径的比较-目标靶点的预测 | 第101-103页 |
| ·以生物量为目标函数时工程菌株的通量平衡分析 | 第103-104页 |
| ·本章小结 | 第104-106页 |
| 第六章 乙醛酸循环的改造以及代谢副产物的消除 | 第106-126页 |
| ·实验材料 | 第107-110页 |
| ·菌种 | 第107-109页 |
| ·主要仪器 | 第109页 |
| ·主要试剂 | 第109页 |
| ·培养基 | 第109页 |
| ·主要溶液 | 第109-110页 |
| ·实验方法 | 第110-111页 |
| ·结果与讨论 | 第111-125页 |
| ·不同来源丙酮酸羧化酶的比较研究 | 第111-114页 |
| ·iclR 基因敲除菌的构建和发酵特性研究 | 第114-118页 |
| ·TUQ5、TUQ6、TUQ7 菌株的构建和发酵特性研究 | 第118-121页 |
| ·双敲除菌和多敲除菌的构建和发酵特性研究 | 第121-122页 |
| ·多敲除菌中表达丙酮酸羧化酶的研究 | 第122-123页 |
| ·TUQ2 中敲除adhEa、ck-ptal、dhA 的研究 | 第123-124页 |
| ·TUQ19/pTrc99A-pyc 中敲除乳酸脱氢酶的研究 | 第124-125页 |
| ·本章小结 | 第125-126页 |
| 第七章 结论与展望 | 第126-129页 |
| ·结论和创新点 | 第126-127页 |
| ·展望 | 第127-129页 |
| 参考文献 | 第129-141页 |
| 附录 | 第141-146页 |
| 论文发表 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147页 |
