| 英文缩写与中英文扩展名 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-45页 |
| 1 玉米遗传转化研究综述 | 第14-27页 |
| ·植物遗传转化的方法、原理及优缺点 | 第14-19页 |
| ·基因枪转化法 | 第14-15页 |
| ·农杆菌介导法 | 第15-17页 |
| ·花粉管通道法 | 第17-18页 |
| ·聚乙二醇介导法 | 第18页 |
| ·电击法 | 第18-19页 |
| ·脂质体介导法 | 第19页 |
| ·农杆菌介导的玉米遗传转化的研究历程 | 第19-22页 |
| ·影响玉米遗传转化的一些关键因素 | 第22-27页 |
| ·玉米遗传转化中不同受体再生体系的建立 | 第22-24页 |
| ·不同受体材料对玉米再生的影响 | 第22-23页 |
| ·基因型对玉米体细胞再生能力的影响 | 第23页 |
| ·培养条件对玉米体细胞再生能力的影响 | 第23-24页 |
| ·受体材料、生长状况及基因型对遗传转化的影响 | 第24页 |
| ·不同的培养基成分对玉米遗传转化的影响 | 第24-26页 |
| ·基本培养基对玉米遗传转化的影响 | 第24-25页 |
| ·培养基中附加其它物质对玉米遗传转化的影响 | 第25-26页 |
| ·农杆菌菌株及载体对遗传转化的影响 | 第26页 |
| ·选择性标记基因对遗传转化的影响 | 第26-27页 |
| ·其它因素的影响 | 第27页 |
| 2 植物启动子研究概况 | 第27-33页 |
| ·高等植物启动子的分类和结构 | 第27-30页 |
| ·高等植物启动子的类别 | 第27-29页 |
| ·组成型启动子 | 第28页 |
| ·组织或器官特异性启动子 | 第28页 |
| ·诱导型启动子 | 第28-29页 |
| ·高等植物启动子的结构特征 | 第29-30页 |
| ·转录起始位点 | 第29页 |
| ·TATA-box | 第29-30页 |
| ·CAAT-box | 第30页 |
| ·G-box | 第30页 |
| ·增强子和沉默子 | 第30页 |
| ·烟草中与花发育有关启动子的研究现状 | 第30-32页 |
| ·烟草花药特异表达启动子 | 第31页 |
| ·烟草花粉特异表达启动子 | 第31-32页 |
| ·Zm13基因启动子的研究现状 | 第32页 |
| ·启动子研究与作物雄性不育 | 第32-33页 |
| 3 基因工程创建雄性不育系研究概况 | 第33-45页 |
| ·植物雄性不育(male sterility)的类型及遗传机制 | 第33-36页 |
| ·细胞核不育型(GMS) | 第34页 |
| ·隐性核不育 | 第34页 |
| ·显性核不育 | 第34页 |
| ·细胞质雄性不育型(CMS) | 第34-36页 |
| ·孢子体细胞质雄性不育 | 第35页 |
| ·配子体细胞质雄性不育 | 第35-36页 |
| ·基因工程创建雄性不育系的研究进展 | 第36-41页 |
| ·破坏花粉或花药的正常发育创造雄性不育性状 | 第36-39页 |
| ·Mariani雄性不育系统(barnase／barstar—bar系统) | 第37-38页 |
| ·通过提早降解胼胝质获得植物雄性不育系 | 第38-39页 |
| ·喷施外源物质诱导产生植物雄性不育 | 第39页 |
| ·通过其它细胞毒素创建雄性不育 | 第39页 |
| ·利用反义基因技术创造雄性不育性状 | 第39-40页 |
| ·通过共抑制创造雄性不育 | 第40-41页 |
| ·通过细菌影响小孢子发育引起雄性不育 | 第41页 |
| ·argE基因及其应用研究进展 | 第41-45页 |
| 第二部分 研究内容 | 第45-113页 |
| 第一章 农杆菌介导的玉米胚性愈伤的遗传转化研究 | 第45-73页 |
| 第一节 本研究的目的、意义及内容 | 第45-46页 |
| 1 本研究的背景、目的及意义 | 第45-46页 |
| 2 研究内容 | 第46页 |
| 第二节 材料与方法 | 第46-54页 |
| 1 实验材料 | 第46-49页 |
| ·供试玉米材料 | 第46页 |
| ·菌株及质粒 | 第46-47页 |
| ·重要试剂、耗材及其它材料 | 第47页 |
| ·各种培养基及成分 | 第47-49页 |
| ·玉米培养基母液配方 | 第47-48页 |
| ·玉米愈伤诱导及后期培养培养基成分 | 第48页 |
| ·玉米愈伤侵染过程所用培养基成分 | 第48-49页 |
| 2 实验方法 | 第49-54页 |
| ·农杆菌菌株的准备 | 第49页 |
| ·玉米胚性愈伤的获得及农杆菌介导的遗传转化 | 第49-51页 |
| ·玉米胚性愈伤的诱导及继代培养 | 第49-50页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化流程 | 第50-51页 |
| ·农杆菌侵染液的准备 | 第50页 |
| ·愈伤侵染 | 第50页 |
| ·抗性愈伤的筛选及再生 | 第50-51页 |
| ·玉米愈伤及转基因植株叶片的GUS表达分析 | 第51-52页 |
| ·GUS染色液的配制 | 第51-52页 |
| ·愈伤GUS瞬时表达率分析 | 第52页 |
| ·转基因植株叶片GUS染色 | 第52页 |
| ·玉米抗性愈伤率分析 | 第52页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第52-53页 |
| ·玉米叶片DNA微量提取法 | 第52-53页 |
| ·抗性植株的PCR检测 | 第53页 |
| ·玉米胚性愈伤对潮霉素抗性临界浓度的决定 | 第53-54页 |
| 第三节 结果与分析 | 第54-66页 |
| 1 玉米胚性愈伤对潮霉素抗性临界浓度的决定 | 第54-55页 |
| 2 不同菌株及愈伤材料对玉米愈伤遗传转化效率的影响 | 第55-57页 |
| 3 不同侵染时间对玉米愈伤遗传转化效率的影响 | 第57-58页 |
| 4 不同菌液(侵染液)浓度对玉米愈伤遗传转化效率的影响 | 第58-59页 |
| 5 侵染液中不同浓度Tween 20对玉米愈伤遗传转化效率的影响 | 第59-60页 |
| 6 不同共培养温度对玉米愈伤遗传转化效率的影响 | 第60-61页 |
| 7 不同共培养pH值对玉米愈伤遗传转化的影响 | 第61-62页 |
| 8 共培养基中不同浓度乙酰丁香酮对玉米愈伤遗传转化效率影响 | 第62-63页 |
| 9 共培养基中不同浓度L—半胱氨酸对玉米愈伤遗传转化效率的影响 | 第63-64页 |
| 10 共培养基中不同浓度二硫基苏糖醇对玉米愈伤遗传转化效率的影响 | 第64-65页 |
| 11 T_0代转基因植株的PCR检测及叶片的GUS表达分析 | 第65-66页 |
| 第四节 讨论 | 第66-72页 |
| 1 潮霉素筛选浓度对转基因愈伤存活率的影响 | 第66页 |
| 2 农杆菌菌株类型对遗传转化的影响 | 第66-67页 |
| 3 农杆菌的生长状态对遗传转化的影响 | 第67-68页 |
| 4 农杆菌侵染液浓度和侵染时间对愈伤转化的影响 | 第68页 |
| 5 共培养环境对遗传转化的影响 | 第68-70页 |
| ·pH值 | 第69页 |
| ·温度 | 第69-70页 |
| 6 表面活性剂和抗氧化剂在愈伤遗传转化中的作用 | 第70-71页 |
| 7 玉米遗传转化过程中阳性转化细胞和再生植株的一致性 | 第71-72页 |
| 第五节 小结 | 第72-73页 |
| 第二章 玉米花粉特异表达启动子Zm13的分离及功能鉴定、烟草花粉特异表达启动子序列NTPp13的分离、结构特征及时空表达分析 | 第73-101页 |
| 第一节 本研究背景、目的意义及技术路线 | 第73-76页 |
| 1 本研究背景 | 第73-74页 |
| 2 本研究目的及意义 | 第74-75页 |
| ·对Zm13启动子活性检测 | 第74页 |
| ·对野生型烟草中NTPp13序列的功能鉴定 | 第74-75页 |
| 3 本研究的技术路线 | 第75-76页 |
| 第二节 材料与方法 | 第76-91页 |
| 1 实验材料 | 第76-77页 |
| ·植物材料 | 第76页 |
| ·菌株及质粒 | 第76页 |
| ·重要试剂、耗材及其它材料 | 第76页 |
| ·培养基及成分 | 第76-77页 |
| 2 实验办法 | 第77-91页 |
| ·玉米花粉特异表达启动子Zm13及烟草特异表达片段NTPp13的获得 | 第77-78页 |
| ·玉米叶片和烟草叶片DNA微量提取法 | 第77页 |
| ·玉米中Zm13启动子及烟草中NTPp13片段的PCR扩增 | 第77-78页 |
| ·玉米启动子Zm13及烟草启动子片段NTPp13表达载体构建 | 第78-83页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第78-79页 |
| ·目的片段与T载体连接 | 第79页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌DH5α感受态 | 第79-80页 |
| ·蓝白斑筛选平板的制备 | 第80页 |
| ·热激转化法将质粒转入大肠杆菌 | 第80页 |
| ·转化子的鉴定 | 第80页 |
| ·细菌培养、收集以及碱裂解法提取质粒DNA | 第80-81页 |
| ·聚乙二醇法沉淀纯化质粒DNA | 第81-82页 |
| ·质粒及载体的酶切 | 第82-83页 |
| ·Zm13及NTPp13片段与载体pBI121连接 | 第83页 |
| ·热激法将质粒载体转入大肠杆菌DH5α感受态以及转化子的鉴定 | 第83页 |
| ·三亲交配法将表达载体pBI121—Zm13(或NTPp13)导入农杆菌 | 第83页 |
| ·农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草 | 第83-84页 |
| ·转基因烟草继代及移栽 | 第84页 |
| ·转Zm13启动子烟草植株的PCR检测及Zm13启动子活性鉴定 | 第84-85页 |
| ·转Zm13启动子烟草叶片DNA微量提取法及GUS染色液的配制 | 第84页 |
| ·转Zm13启动子抗性烟草植株的PCR检测 | 第84-85页 |
| ·Zm13启动子的活性鉴定 | 第85页 |
| ·转NTPp13-GUS烟草植株的分子检测 | 第85-90页 |
| ·转NTPp13-GUS抗性烟草植株的PCR检测 | 第85页 |
| ·转NTPp13-GUS烟草植株的PCR—Southern检测 | 第85-90页 |
| ·探针DNA序列的获得 | 第85页 |
| ·转基因烟草植株的PCR—Southern检测 | 第85-90页 |
| ·NTPp13片段的启动子活性验证及时空特异表达 | 第90-91页 |
| ·NTPp13片段在烟草花药中的活性验证 | 第90页 |
| ·NTPp13片段的特异表达部位鉴定 | 第90页 |
| ·不同花期NTPp13—GUS表达量分析 | 第90-91页 |
| ·NTPp13片段启动子活性对温度影响的稳定性分析 | 第91页 |
| ·GUS活性荧光定量方法 | 第91页 |
| 第三节 结果与分析 | 第91-98页 |
| 1 玉米花粉特异表达启动子Zm13的分离及活性鉴定 | 第91-94页 |
| ·Zm13启动子的分离 | 第91-92页 |
| ·Zm13启动子活性鉴定 | 第92-94页 |
| 2 烟草花粉特异表达序列NTPp13的结构和功能分析 | 第94-98页 |
| ·NTPp13序列的结构分析 | 第94-95页 |
| ·转NTPp13-GUS烟草植株的分子检测 | 第95-96页 |
| ·NTPp13序列的启动子活性验证及时空特异表达 | 第96-98页 |
| ·NTPp13启动子片段对温度改变的稳定性分析 | 第98页 |
| 第四节 讨论 | 第98-100页 |
| 1 玉米花粉特异表达启动子Zm13在创建雄性不育系中的应用 | 第98-99页 |
| 2 对NTPp13启动子序列的研究及意义 | 第99-100页 |
| 第五节 小结 | 第100-101页 |
| 第三章 基因工程创建玉米雄性不育系的初步研究 | 第101-113页 |
| 第一节 本研究目的、意义及技术路线 | 第101页 |
| 1 本研究目的及意义 | 第101页 |
| 2 本研究的技术路线 | 第101页 |
| 第二节 材料与方法 | 第101-107页 |
| 1 实验材料 | 第101-104页 |
| ·植物材料 | 第101-102页 |
| ·菌株及质粒 | 第102页 |
| ·重要试剂、耗材及其它材料 | 第102页 |
| ·培养基及成分 | 第102-104页 |
| 2 实验方法 | 第104-107页 |
| ·脱乙酰酶基因argE的获得 | 第104-105页 |
| ·大肠杆菌菌株基因组的提取 | 第104页 |
| ·argE基因的获得 | 第104-105页 |
| ·玉米花粉特异表达启动子Zm13的获得 | 第105页 |
| ·玉米表达载体p1300-Zm13-argE的构建 | 第105-106页 |
| ·玉米幼胚及胚性愈伤的遗传转化 | 第106页 |
| ·农杆菌介导的玉米愈伤的遗传转化 | 第106页 |
| ·农杆菌介导的幼胚的遗传转化 | 第106页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第106-107页 |
| ·抗性植株的PCR检测 | 第106-107页 |
| ·PCR阳性植株的PCR-Southern检测 | 第107页 |
| ·杂交探针的获得 | 第107页 |
| ·PCR-Southern杂交过程 | 第107页 |
| 第三节 结果与分析 | 第107-110页 |
| 1 脱乙酰酶基因argE的获得 | 第107-108页 |
| 2 玉米表达载体p1300-Zm13-argE的构建 | 第108页 |
| 3 农杆菌介导的玉米愈伤的遗传转化 | 第108-109页 |
| 4 转基因植株的分子检测 | 第109-110页 |
| 第四节 讨论 | 第110-112页 |
| 1 通过花粉特异启动子创建雄性不育系 | 第110-111页 |
| 2 通过外施N-乙酰-草丁膦诱导转argE基因植株雄性不育系策略的优缺点 | 第111-112页 |
| 第五节 小结 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-125页 |
| 致谢 | 第125-126页 |
