| 第一章 前言 | 第1-44页 |
| ·胰腺癌的流行病学 | 第13页 |
| ·胰腺癌的生物学研究 | 第13-15页 |
| ·肿瘤的基因治疗 | 第15-22页 |
| ·基因治疗的途径 | 第15-19页 |
| ·基因治疗载体 | 第19-22页 |
| ·本研究的治疗策略 | 第22-23页 |
| ·RNA干涉(RNAi) | 第23-33页 |
| ·RNAi现象的发现和发展 | 第24-25页 |
| ·RNAi的作用特点 | 第25-27页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第27-29页 |
| ·RNAi的应用 | 第29-33页 |
| ·MUC1启动子与胰腺癌的靶向治疗 | 第33-38页 |
| ·MUC1及其启动子的特点 | 第33-34页 |
| ·MUC1基因表达的调控 | 第34-35页 |
| ·MUC1的生物学功能 | 第35-37页 |
| ·MUC1在肿瘤治疗中的应用 | 第37-38页 |
| ·生长抑素和生长抑素受体 | 第38-43页 |
| ·概述 | 第38-41页 |
| ·生长抑素对肿瘤的抑制作用机制 | 第41-43页 |
| ·结论 | 第43-44页 |
| 第二章 AdMuC1-hSSTR2选择性抑制Panc-1细胞生长的初步实验 | 第44-75页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·材料与方法 | 第45-65页 |
| ·质粒、菌株、酶、试剂(盒) | 第45-46页 |
| ·细胞、培养基、血清、脂质体和抗体 | 第46页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第46-48页 |
| ·胰腺癌细胞基因组的提取 | 第48页 |
| ·“巢式”PCR(nest PCR)扩增MUC1启动子 | 第48-49页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第49-50页 |
| ·DNA测序 | 第50页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第50-52页 |
| ·酶切与连接 | 第52页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化 | 第52-54页 |
| ·重组质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第55页 |
| ·哺乳动物细胞培养、冻存和复苏 | 第55-57页 |
| ·同源重组法构建重组腺病毒 | 第57-59页 |
| ·病毒的大量制备、纯化和滴度测定 | 第59-61页 |
| ·质粒DNA对细胞的转染 | 第61-62页 |
| ·RT-PCR | 第62-63页 |
| ·western blot | 第63-65页 |
| ·荧光显微镜观察(Hoechst 33258染色) | 第65页 |
| ·细胞增殖实验(血球细胞计数) | 第65页 |
| ·统计学分析 | 第65页 |
| ·研究结果 | 第65-72页 |
| ·nest PCR法扩增得到MUC1启动子序列及测序结果 | 第65-67页 |
| ·启动子MUC1、CMV的特异性和活性检测 | 第67-68页 |
| ·RT-PCR分析重组病毒中hSSTR2基因在mRNA水平的表达 | 第68-69页 |
| ·重组病毒中外源基因hSSTR2蛋白表达检测 | 第69-70页 |
| ·AdMUC1-hSSTR2病毒对Panc-1细胞的凋亡检测 | 第70-71页 |
| ·重组病毒抑制Panc-1细胞增殖分析 | 第71页 |
| ·AdMUC1-hSSTR2病毒抑制细胞增殖的机制 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| 第三章 AdH1-K-ras~(val12)引起Panc-1细胞恶性表型的逆转 | 第75-89页 |
| ·引言 | 第76页 |
| ·材料与方法 | 第76-81页 |
| ·质粒、酶和试剂(盒) | 第76页 |
| ·细胞、培养基、血清、抗体和探针 | 第76-77页 |
| ·重组质粒的构建 | 第77页 |
| ·同源重组法构建重组腺病毒 | 第77页 |
| ·western blot | 第77页 |
| ·northern blot | 第77-79页 |
| ·流式细胞术检测凋亡细胞数 | 第79-80页 |
| ·细胞增殖实验(软琼脂培养法) | 第80页 |
| ·统计学分析 | 第80-81页 |
| ·研究结果 | 第81-87页 |
| ·重组腺病毒AdH1-K-ras~(val12)、AdH1-empty和AdH1-p53的构建 | 第81-82页 |
| ·腺病毒AdH1-K-ras~(val12)的分子水平效应 | 第82-84页 |
| ·腺病毒AdH1-K-ras~(val12)的细胞水平效应 | 第84-85页 |
| ·AdH1-K-ras~(val12)病毒的特异性检测 | 第85-87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 第四章 腺病毒Ad.rms对胰腺癌的靶向性双基因治疗 | 第89-103页 |
| ·引言 | 第90页 |
| ·材料与方法 | 第90-92页 |
| ·质粒、酶和试剂 | 第90页 |
| ·细胞、培养基、血清、抗体和动物 | 第90页 |
| ·重组质粒的构建 | 第90页 |
| ·western blot | 第90页 |
| ·细胞存活率实验 | 第90-91页 |
| ·细胞增殖实验(软琼脂培养法) | 第91页 |
| ·流式细胞仪检测亚二倍体细胞 | 第91页 |
| ·动物实验 | 第91页 |
| ·组织切片凋亡分析—DNA原位末端标记法(TUNEL) | 第91-92页 |
| ·实验结果 | 第92-100页 |
| ·Ad.rms的表达盒结构图 | 第92页 |
| ·Western blot检测K-ras~(val12)和hSSTR2的蛋白表达 | 第92-94页 |
| ·Ad.rms抑制Panc-1细胞增殖效应 | 第94-96页 |
| ·Ad.rms感染Panc-1细胞后的DNA含量测定分析 | 第96页 |
| ·Panc-1细胞感染Ad.rms后存活率检测 | 第96-98页 |
| ·荷人瘤Panc-1裸鼠模型的建立 | 第98页 |
| ·Ad.rms在动物水平上的抗肿瘤效应 | 第98-100页 |
| ·讨论 | 第100-103页 |
| 参考文献 | 第103-119页 |
| 硕士期间发表和待发表的文章 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
