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猪瘟病毒内蒙古野毒株与标准疫苗株(C株)E2基因克隆与序列分析

1 引言第1-19页
   ·猪瘟概述第6页
   ·猪瘟的病原第6-14页
     ·猪瘟病毒的培养特性第7-8页
     ·猪瘟病毒的抗原性第8-10页
     ·猪瘟病毒致病机制及病理学特征第10页
     ·猪瘟病毒在宿主细胞中的繁殖过程第10-11页
     ·猪瘟病毒的基因组结构第11-12页
     ·猪瘟病毒蛋白结构及功能第12-14页
   ·猪瘟的诊断第14-16页
   ·猪瘟病毒疫苗研究第16-17页
   ·本研究的目的与意义第17-19页
2 实验研究内蒙古猪瘟野毒(NMHL)株与C株细胞毒E2基因的克隆第19-30页
   ·材料与方法第19-22页
     ·实验动物、病料与毒株第19页
     ·主要仪器第19页
     ·试剂及配制第19-20页
     ·受体菌与质粒载体第20-21页
     ·引物的设计第21-22页
   ·实验流程第22-23页
   ·实验方法第23-30页
     ·猪瘟阳性病料的获取第23页
     ·猪瘟兔化弱毒(细胞毒)的浓缩提纯第23-24页
     ·提取RNA 前的准备第24页
     ·猪瘟病毒内蒙野毒株与标准弱毒疫苗株病毒RNA 的提取第24页
     ·提取病毒RNA的定量第24页
     ·RNA完整性的鉴定第24-25页
     ·反转录(RT)第25页
     ·PCR及nPCR反应第25-27页
     ·E2基因的克隆第27-28页
     ·克隆产物的鉴定第28-30页
     ·重组质粒序列测定及分析第30页
3 实验结果第30-42页
   ·病猪的临床表现、病理剖检变化及病料实验室诊断结果第30-31页
   ·提取RNA的定量结果第31页
   ·取RNA完整性的鉴定第31-32页
   ·RT-PCR产物的电泳结果第32-33页
   ·重组质粒提取结果第33页
   ·重组质粒的酶切鉴定第33-34页
   ·重组质粒的PCR鉴定第34页
   ·核苷酸序列测定第34-41页
   ·同源性分析第41-42页
   ·遗传进化树第42页
4 分析和讨论第42-49页
   ·病毒RNA的提取第42页
   ·关于如何防止RNA降解第42-44页
   ·关于Trizol法提取总RNA第44-45页
   ·关于Nested-PCR第45页
   ·关于RT-PCR模板和引物的使用量问题第45-46页
   ·连接和转化第46页
   ·重组质粒的初步鉴定a-互补第46-47页
   ·序列分析第47-49页
5 结论第49-50页
致谢第50-51页
参考文献第51-56页
作者简介第56页

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